儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 產(chǎn)品僅供科研血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱：產(chǎn)毒副溶血弧菌PCR試劑盒試劑盒
英文名稱：詳見(jiàn)說(shuō)明書
編號(hào)： FSP2429
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞，95-D細(xì)胞anti- USHBP1 antibody2-甲基-5-氰基苯硼酸人膽囊上皮細(xì)胞

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞，MHCC-97H細(xì)胞anti- USMG5 antibody木犀草苷人肺成纖維細(xì)胞，HPF細(xì)胞

人宮頸癌細(xì)胞，C33A細(xì)胞anti- USP1 antibody干酪素鈉人肝Kuffer細(xì)胞

人宮頸癌細(xì)胞，CASKI細(xì)胞anti- USP1 antibody頭孢噻呋鈉人肝癌原代細(xì)胞

人宮頸癌細(xì)胞，HELA-S3細(xì)胞anti- USP10 antibody葡萄糖酸氯己定人肝單核細(xì)胞，HLMC細(xì)胞

人骨肉瘤細(xì)胞，HOS細(xì)胞anti- USP10 antibody葡萄糖酸氯己定人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，HHSECP細(xì)胞

人骨肉瘤細(xì)胞，MG-63細(xì)胞anti- USP11 antibodyN(α)-Z-D-2,3-二氨基丙酸人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，Human Intrahepatic Biliary Epithelial Cells細(xì)胞

人骨肉瘤細(xì)胞，SJSA-1細(xì)胞anti- USP11 antibodyN(α)-Z-D-2,3-二氨基丙酸人肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞
產(chǎn)毒副溶血弧菌PCR試劑盒試劑盒Ginsenoside Rh1ULBP2/N2DL2  UL16結(jié)合蛋白2抗體1-苯基-1-環(huán)丙羧酸5-CR6G

Ginsenoside RH3ULBP3/N2DL3  UL16結(jié)合蛋白3抗體2-羥基嘧啶6-CR6G

Ginsenoside RoUSF-1  等上游刺激因子1抗體3,3,3-三氟丙酮酸乙酯5(6)-CR6G, SE

2,3- hydroxybetulinic acidVPS18  空泡分選蛋白18抗體2-氯-5-吡啶硼酸5-CR6G, SE

2- hydroxy eupatolideUbiquitin/UBC/UB  泛素蛋白抗體叔丁基膦6-CR6G, SE

4- - demethylepipodophyllotoxinUSP1  泛素特異性蛋白酶1抗體2-氟萘5(6)-TAMRA

L-4- 4-hydroxyisoleucineUROD  尿卟啉原脫羧酶抗體2,2',4,4'-四溴聯(lián)苯醚5-TAMRA

FraxinelloneUQCRC2  線粒體輔酶細(xì)胞色素C還原酶核心蛋白2抗體奎寧單鹽酸鹽二水合物6-TAMRA
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí)，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。