PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:口腔鏈球菌PCR試劑盒
英文名稱:Streptococcus oralisPCR
編號: FSP2254
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體特價促銷anti- SLC25A15 antibody苯并咪唑-5-羧酸(R)-2-甲基-CBS-惡唑硼烷
Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939)磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體特價促銷anti- SLC25A18 antibody5-溴-2-氨基-4-氟吡啶2,3,4,5,6-五氟苯甲酸
Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571)磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體特價促銷anti- SLC25A2 antibody5-溴-2-氨基-4-氟吡啶1-(4-甲氧基苯基)哌嗪
Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462)磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體特價促銷anti- SLC25A20 antibody5-溴-2-氨基-4-氟吡啶雙乙酰丙酮基二丁基錫
Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyhr927)磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體特價促銷anti- SLC25A22 antibody5-溴-2-氟嘧啶阿卡波糖
Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1254)磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體特價促銷anti- SLC25A23 antibody5-溴-2-氟嘧啶溴五氟苯
Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540)磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體特價促銷anti- SLC25A24 antibody2-溴-4-氟吡啶5-氯吡啶-2-醛
Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1420)磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體特價促銷anti- SLC25A25 antibody6-溴-2,4-二氯喹唑啉1-(2-氟苯基)哌嗪
口腔鏈球菌PCR試劑盒Mouse transforming growth factor α,TGF-α ELISA試劑盒MYOZ/MYOZ1 MYOZ抗體2,6-二氨基蒽醌 4,6-二氟-1,3-苯并噻唑-2-胺
Mouse Transforming Growth factor β1,TGF-β1 ELISA試劑盒 MyoD1/Myf3 肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體D-3-苯乳酸 阿維巴坦鈉
Mouse transforming growth factorβ2,TGFβ2 ELISA試劑盒phospho-MyoD1(Ser200) 磷酸化肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體二甲苯雙(三苯基溴化膦) 2-溴甲基四氫呋喃
Mouse Tri-iodothyronine,T3 ELISA試劑盒SM Myosin (Smooth Muscle) 人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠單抗3-氯-2-氟芐溴 環(huán)戊酮肟
Mouse Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA試劑盒Myoglobin 肌紅蛋白抗體4-羥基-2-巰基-5-甲基嘧啶 3-(3-甲氧基苯基)-1,2-惡唑-5-胺
Mouse Troponin T,Tn-T ELISA試劑盒CHRNA4 煙堿型乙酰膽堿受體α4抗體2-氟-3-溴吡啶 1-二甲基氨基-2-硝基乙烯
Mouse trypsin ELISA試劑盒CHRNA7 煙堿型乙酰膽堿受體α7抗體3,4'-二氯二苯醚 噁唑-5-羧酸乙酯
Mouse trypsin ELISA試劑盒CHRNA2(neuronal) 煙堿型乙酰膽堿受體A2(神經(jīng)型)抗體2-氯-5-甲氧基苯甲酸 亞磷酸二異丁酯
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 口腔鏈球菌;PCR試劑盒;50T;FSP1231;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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