PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:甲型流感病毒通用PCR檢測試劑盒
英文名稱:Influenza Virus ARTPCR
編號: FSP1801
分類:PCR檢測試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí),吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
Phospho-cdc25A (Ser124)磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體特價(jià)促銷anti- ITM2A antibody細(xì)胞S6 KINASE激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)T淋巴細(xì)胞白血病同源蛋白2抗體
Phospho-cdc25A (Ser177)磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體特價(jià)促銷anti- ITM2C antibody組織S6 KINASE激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)跨膜蛋白132A抗體
Phospho-cdc25A (Ser292)磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體特價(jià)促銷anti- ITM2C antibody細(xì)胞SGK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)四聚體多肽蛋白21B抗體
CD335/NKp46/NCR1細(xì)胞毒性受體NK-p46抗體特價(jià)促銷anti- ITPA antibody組織SGK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)辣椒素受體3抗體
CD336/NKp44/NCR2細(xì)胞毒性受體NK-p44抗體特價(jià)促銷anti- ITPK1 antibody細(xì)胞SPRK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)TEX261蛋白抗體
CD337/NKp30/NCR3細(xì)胞毒性受體NK-p30抗體特價(jià)促銷anti- ITPKA antibody組織SPRK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)p53誘導(dǎo)蛋白5抗體
CD328/Siglec-7唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素7抗體特價(jià)促銷anti- ITPKB antibody細(xì)胞TAK1-TAB1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)UNC80蛋白抗體
Cdc25B細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體特價(jià)促銷anti- ITPKC antibody組織TAK1-TAB1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5抗體
甲型流感病毒通用PCR檢測試劑盒HDAC1分析試劑盒 EpiQuik HDAC1 Assay KitFrataxin 線粒體型共濟(jì)失調(diào)蛋白抗體Lip2000 Transfection ReagentOxysophoridine;氧化槐定堿
HDAC2分析試劑盒 EpiQuik HDAC2 Assay KitPhospho-SRF (Ser77) 磷酸化生長激素釋放因子抗體(血清應(yīng)答因子)West Pico ECLIsoniazid;異煙肼
HDAC2分析試劑盒 EpiQuik HDAC2 Assay KitTEF3/TEAD4 轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體West Femto ECLGalangin;高良姜素
HDAC8分析試劑盒 EpiQuik HDAC8 Assay KitTranscription factor 25/Nulp1 核轉(zhuǎn)錄因子25抗體West Dura ECLAmitriptyline hydrochloride;鹽酸阿米替林
HDAC8分析試劑盒 EpiQuik HDAC8 Assay KitPITX2 成對樣同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子2抗體ECL PlusAlbendazole;阿苯達(dá)唑
原位H3-K9乙酰化分析試劑盒 EpiQuik In Situ H3-K9 Acetylation Assay KitRBM20 RNA結(jié)合蛋白20抗體10000X GelRed nucleic acid gel stain in water (效果同GelRed)Columbin;古倫賓
通用組蛋白H3乙?;治鲈噭┖?EpiQuik Global Histone H3 Acetylation Assay KitZNF828/C13orf8 鋅指蛋白828抗體DuGreen nucleic acid gel stain 10000× in water (效果同GelGreen)Sodium sulfadiazine;磺胺嘧啶鈉
通用組蛋白H3乙酰化分析試劑盒 EpiQuik Global Histone H3 Acetylation Assay KitSPAC7/C13ORF28 精子頂端體相關(guān)蛋白7抗體Sybr Green I nucleic acid gel stain 10000× concentrate in DMSO* (Electrophoresis Grade)Tectorigenin;鳶尾黃素
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 甲型流感病毒通用;PCR檢測試劑盒;50T;FSP1801;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
公司秉承“專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國科研事業(yè)更好的,更專業(yè)的服務(wù)!
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