產(chǎn)品名稱 : 過氧化物測(cè)試盒 | QuantiChrom™ Peroxide Assay Kit

分類名稱 : 氧化應(yīng)激測(cè)定,代謝產(chǎn)物分析

產(chǎn)品說明

過氧化物(如過氧化氫H2O2)是在氧化應(yīng)激條件下形成的一種重要的活性氧。過氧化物含量高可能與衰老、哮喘、糖尿病、動(dòng)脈漿樣硬化、白內(nèi)障、關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)組織退化等疾病有關(guān)。

在科研和藥物研發(fā)中，方便、直接、自動(dòng)化的過氧化物含量檢測(cè)手段是最為理想的。本公司研制的過氧化物檢測(cè)試劑盒可直接用于生物樣品的檢測(cè)，免除了預(yù)處理過程。檢測(cè)原理是利用試劑中的Fe2+ 被樣品中的過氧化物氧化為Fe3+，并能與二甲酚橙反應(yīng)生成紫色復(fù)合物的特性，在波長(zhǎng)540-610nm(585nm)下檢測(cè)，其顏色深淺程度與樣品中過氧化物的含量成正比。通過配方的改良，充分減小了未處理的樣品中其它雜質(zhì)的干擾。

產(chǎn)品特點(diǎn)

靈敏、準(zhǔn)確：檢測(cè)范圍在0.4 – 100 μM (14 – 3400 ng/mL)。

簡(jiǎn)單、高通量：整個(gè)測(cè)試過程只需加入一種工作試劑并反應(yīng)30分鐘。利用96孔板高通量檢測(cè)，每天可以測(cè)試上千份樣本。

適用范圍

1． 檢測(cè)生物樣品(如，血清、血漿、尿液、細(xì)胞溶液和培養(yǎng)液)中過氧化物含量。

2．適用于藥理學(xué)研究，檢測(cè)藥物對(duì)過氧化物代謝的影響。

試劑盒規(guī)格(96孔板供250份測(cè)試)

   試劑A：1 mL              試劑B：50 mL  

   標(biāo)準(zhǔn)品：1 mL 3% 雙氧水(H2O2) 

儲(chǔ)藏條件：在室溫下運(yùn)輸, 4°C下保存, 保質(zhì)期為六個(gè)月。

注意事項(xiàng)：本產(chǎn)品僅供研究用。使用過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)安全措施。

96孔板檢測(cè)步驟

樣本處理：一些化學(xué)成分會(huì)干擾檢測(cè)，在樣本準(zhǔn)備時(shí)要避免接觸。這類物質(zhì)包括：抗壞血酸、乙二胺四乙酸、肝磷脂、二甲基亞砜(>0.02%)，三硝基苯酚(>0.6%)，SDS(>0.12%)，氨基丁三醇(>8mM)和乙醇(>0.4%)。

新鮮的樣品可以馬上用于檢測(cè)，或在-20°C下保存，不要反復(fù)凍融。如果樣品出現(xiàn)顆粒，應(yīng)離心后取上清進(jìn)行檢測(cè)。

試劑準(zhǔn)備：檢測(cè)前所有試劑須放置至室溫。每孔需工作試劑100 μL，按試劑A：試劑B = 1：100的比例配制足量工作試劑。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)在檢測(cè)前現(xiàn)配。在1.5mL 的離心管中混合10 μL 3%的雙氧水和990μL 的水。再取混合后的溶液5μL 與1465μL水混合。最終的雙氧水的濃度為30 μM(標(biāo)注“預(yù)混合液”)，按下表比例將其稀釋。

2. 將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品各取40 μL，放入透明平底96孔板不同孔中。將200 μL工作試劑加入所有標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中。

3. 室溫下反應(yīng)30分鐘，在585nm(波長(zhǎng)范圍540-610nm)處讀取吸光度。注：若極少數(shù)情況下加入試劑后產(chǎn)生沉淀，可將反應(yīng)液

轉(zhuǎn)入1.5毫升的離心管，14,000rpm離心2分鐘，再小心移取200 mL上清液至一干凈孔，讀OD值，乘以1.2校正體積因素。

濃度計(jì)算

用標(biāo)準(zhǔn)品OD值減去空白對(duì)照(水, 8號(hào))OD值，以此值對(duì)雙氧水濃度作圖(見標(biāo)準(zhǔn)曲線)。

樣品：用樣品(OD值)減去空白對(duì)照(OD值)，以此OD差值對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出樣品過氧化物的濃度。

單位換算: 1 μM 雙氧水相當(dāng)于34 ng/mL 或 34 ppb

實(shí)驗(yàn)必需品(未提供)

吸液用儀器及附件，96孔板和微孔板分析儀。

96孔板測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)曲線

論文發(fā)表

[1]. Chi Li Yu et al (2008). A novel caffeine dehydrogenase in pseudomonas sp. strain CBB1 oxidizes caffeine to trimethyluric acid. J. Bacteriol. 190(2):772–776.

[2]. Deshmane, S.L. et al (2009). Activation of the oxidative stress pathway by HIV-1 Vpr leads to induction of hypoxia-inducible factor 1alpha expression. J Biol Chem. 284(17):11364-11373. 

[3]. Giao, N.N. et al (2007). Water deficit induced pollen sSterility associated with a programmed cell death and oxidative stress in rice anthers. Proceedings the 2nd International Rice for the Future pp202-209.