"NCI-BL1339細胞:人B淋巴細胞系 細胞背景資料:詳見相關文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞生長:懸浮 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:3-4天換液1次。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞培養(yǎng)方面注意的幾點:無菌意識要強:實驗進行前,超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風扇運轉數(shù)分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經干細胞,有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計時,一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。 有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞建議只吹打,不消化)其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內,培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞上乘形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。 細胞培養(yǎng)相關問題總結:冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管之爆裂;細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,是否應馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題;可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活;培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?或根本沒有影響?一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?除于特殊篩選系統(tǒng)中外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。 TE-5細胞系相關產品:Leydig細胞、KU1919細胞、T.T細胞 YAC-1細胞系相關產品:THLE-3細胞、Hu-P-T3細胞、THP 1細胞 P388D1細胞系相關產品:MCF7ADR細胞、LTEP-sm細胞、HCC-70細胞 NCTC 929細胞系相關產品:Panc02.03細胞、HPMEC細胞、S3 HeLa細胞 Detroit 562細胞系相關產品:SUDHL6細胞、PaTu 8988s細胞、Hs746T細胞 HCC94細胞系相關產品:HCC-2218細胞、AN-3細胞、H2227細胞 ASH-3細胞系相關產品:H-1703細胞、SW756細胞、NCI-H2342細胞 D283-MED細胞系相關產品:MBVP細胞、CAL 78細胞、WM115-mel細胞 J82 COT細胞系相關產品:TE-1細胞、Namalva細胞、NCIH196細胞 M-O7e細胞系相關產品:HCE-T細胞、EFO27細胞、NCIH548細胞 TE-32細胞系相關產品:P3-Jiyoye細胞、hTERT-RPE細胞、EVSAT細胞 SPDC-CCL141細胞系相關產品:CCC-HEH-2細胞、CHP-126細胞、LTEP a2細胞 Pa17C細胞系相關產品:H-345細胞、2B4-L細胞、HT 1197.T細胞 KP4細胞系相關產品:NS653細胞、F9細胞、VP229細胞 FHs 74 Int細胞系相關產品:KPL1細胞、H-510細胞、HEC-251細胞 ARPE19細胞系相關產品:Balb/3T3-4-Cl31細胞、U 937細胞、IM 9細胞 ABC1細胞系相關產品:Hs-852-T細胞、Sci-1細胞、R1800[RA]細胞 CATHa細胞系相關產品:KMB17細胞、GM 637細胞、GM 637細胞 LTEP-sm 1細胞系相關產品:Mono-Mac-6細胞、UPCI-SCC-090細胞、SNU-475細胞 HT-144細胞系相關產品:RMC-1細胞、SU-DH-L5細胞、Line 522細胞 HPAF2細胞系相關產品:EB-2細胞、NCI-H1373細胞、NCIH358細胞 NCI-H929細胞系相關產品:S3-HeLa細胞、Glioma 261細胞、NCI-H865細胞 Mouse Colon 38細胞系相關產品:KTC1細胞、SNU-484細胞、MDA-231細胞 COLO357細胞系相關產品:NCI-H810細胞、WM-239-A細胞、Anip-973細胞 SW 962細胞系相關產品:OCI-Ly07細胞、MMAc.SF細胞、SNU-119細胞 RPVSMC細胞系相關產品:SUM-149細胞、NCI-H1651細胞、NCIH1975細胞 HCT116/L細胞系相關產品:PANC 1005細胞、LAC細胞、U-2-OS細胞 CAMA細胞系相關產品:CAL 51細胞、TSU-Pr1細胞、H929細胞 HET1A細胞系相關產品:COR-L279細胞、Mv 1 Lu細胞、HAVSMC細胞 CW2細胞系相關產品:Epstein-Barr-2細胞、MJ細胞、HS 683T細胞 PL 5細胞系相關產品:U 266細胞、HT144-mel細胞、D10.G4.1細胞 COLO-205細胞系相關產品:NCI-H1105細胞、COV 434細胞、NMCG-1細胞 H-322細胞系相關產品:LOU-NH91細胞、NCI-H125細胞、KLM1細胞 HepaRG細胞系相關產品:Sp2/O細胞、HRVEC細胞、HEMCSS細胞 H4-II-E細胞系相關產品:Hmy.2 CIR細胞、PANC 203細胞、624細胞 KYSE520細胞系相關產品:TE-85細胞、Lewis lung carcinoma細胞、LC-2 ad細胞 KG-1細胞系相關產品:SPC-A1細胞、Hs 895.T細胞、AMJ2-C8細胞 NSI/1-Ag4-1細胞系相關產品:NCI-H2066細胞、Nthy-ori 3.1細胞、alpha TC1 clone 6細胞 Huh-7.5.1細胞系相關產品:L-cells細胞、NPA87細胞、SMA-560細胞 SUM-52-PE細胞系相關產品:MDA MB 175 VII細胞、HN13細胞、HuH1細胞 MDA-MB-175細胞系相關產品:293T/17細胞、MDA-MB-453細胞、UCH-1細胞 HIT clone T15細胞系相關產品:NL20細胞、SVEC4-10細胞、NW-38細胞 J45.01細胞系相關產品:H-87細胞、Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A細胞、KYSE0030細胞 MB157細胞系相關產品:SNU-1細胞、18G3.cl 1細胞、SK-ChA-1細胞 NCI-H1238細胞系相關產品:NCI-H1668細胞、BAC1.2F5細胞、SKMEL-31細胞 EL-4細胞系相關產品:NHDF細胞、16HBE14o-細胞、MHCC-97細胞 VSC4.1細胞系相關產品:UCH-1細胞、KE-37細胞、118 MG細胞 BEL7404細胞系相關產品:Detroit562細胞、LNCaP FGC細胞、SACC83細胞 Hs294T細胞系相關產品:MDAPCa-2b細胞、DanG細胞、J-82細胞 Roswell Park Memorial Institute 7951細胞系相關產品:NCI-ADR-RES細胞、SKN-AS細胞、A-375.S2細胞 SK-NMC細胞系相關產品:Swiss 3T6細胞、PAI細胞、MAEC細胞 D10.G4.1細胞系相關產品:CHP-126細胞、QGY-7703細胞、MDA-MB157細胞 Tissue Culture-1細胞系相關產品:CA-46細胞、HCC1419細胞、WC00059細胞 NFHIOSE-80細胞系相關產品:Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1細胞、RBL2H3細胞、COLO394細胞 CA46細胞系相關產品:H-69細胞、C22 (Clara)細胞、Kasumi-6細胞 C4-1細胞系相關產品:IOSE80UBC細胞、HeLa S 3細胞、COR-L88細胞 B16 melanoma細胞系相關產品:As-PC1細胞、End1/E6E7細胞、H889細胞 H2342細胞系相關產品:HGE細胞、3AA細胞、MC 3T3-E1細胞 H7721細胞系相關產品:OCI-Ly 18細胞、NCIH2073細胞、PY8119細胞 CCD841CoN細胞系相關產品:Molm 14細胞、Hep2細胞、Hs742T細胞 HTR-8細胞系相關產品:NCI-H2330細胞、MDA-157細胞、V 79細胞 CALU1細胞系相關產品:LUDLU1細胞、NCI-HUT-69細胞、H1770細胞 CA46細胞系相關產品:H-69細胞、C22 (Clara)細胞、Kasumi-6細胞 NCI-H920細胞系相關產品:HLEC-B3細胞、Gingival carcinoma Neck Metastasis細胞、CORL279細胞 SNU387細胞系相關產品:3T3L1細胞、SNU739細胞、Human Intestinal 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