"AML-193細(xì)胞:人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)菌操作的演示:凡是帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面;靠近酒精燈火焰操作。器皿使用前必須過火滅菌,繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時(shí)仍要過火。各種操作要靠近酒精燈,動(dòng)作要輕、準(zhǔn)確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管,防止交叉污染。玻璃器械洗消:一、新的玻璃器皿的洗消:自來(lái)水刷洗,除去灰塵。烘干、泡:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀中12小時(shí)以除去臟物、鉛、等物。刷洗、烘干:12小時(shí)后立即用自來(lái)水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來(lái)水沖干凈后用烤箱烘干;泡酸、清洗:用清潔液浸泡12小時(shí),然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來(lái)水沖洗15次,最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。烘干、包裝:洗干凈后先烘干,然后用牛皮紙(油光紙)包裝。高壓消毒:包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子,打開開關(guān)和安全閥,當(dāng)蒸氣成直線上升時(shí),關(guān)閉安全閥,當(dāng)指針指向15磅時(shí),維持20-30分鐘。高壓消毒后烘干。二、舊的玻璃器皿的洗消:刷洗、烘干:使用過的玻璃器皿可直接泡入來(lái)蘇爾液或洗滌劑溶液中,泡過來(lái)蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈,然后烘干。泡酸、清洗:烘干后泡入清潔液(酸液),12小時(shí)后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來(lái)水沖洗(避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗),再用蒸餾水沖洗3次。烘干、包裝:洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝。 絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細(xì)胞。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法5min還不能消化),這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了,說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導(dǎo)致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細(xì)胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細(xì)胞的特性,是因?yàn)橘N壁過程中重新聚集了。這個(gè)時(shí)候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細(xì)胞之后會(huì)對(duì)你越來(lái)越不好。 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了,說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性,無(wú)論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái),這個(gè)時(shí)候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個(gè)細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動(dòng),就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。 RPMI8226/S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL-1細(xì)胞、SMA-560細(xì)胞、BEL7404細(xì)胞 OVCA8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03320細(xì)胞、RCC-10細(xì)胞、hA549細(xì)胞 NSH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:THC-8307細(xì)胞、LA-N-6細(xì)胞、HEK 293 EBNA細(xì)胞 SU-DHL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT78細(xì)胞、NCI-H661細(xì)胞、IOSE-29細(xì)胞 SK-MEL-2-LUC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VE細(xì)胞、CORL105細(xì)胞、B16-F10細(xì)胞 HOC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC 25細(xì)胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞、H-2023細(xì)胞 IPAM-WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mink細(xì)胞、Hs 822.T細(xì)胞、BEND細(xì)胞 CCK-81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H6c7細(xì)胞、MA-c細(xì)胞、Mouse Colon 38細(xì)胞 HT115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML-5細(xì)胞、SNU5細(xì)胞、SKMEL3細(xì)胞 NCIH2452細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-3細(xì)胞、NMCG1細(xì)胞、HPMEC細(xì)胞 FLC-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 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