"8305C細胞：人類甲狀腺未分化癌細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：６傳代
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)：１)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加２-３ml ０.２５%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通?？刂圃冢?２min)；２)鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散；３)取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；４)注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周２-３次)，待細胞密度達到８０%以后重復１項操作或者凍存；特別注意：(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng))１)收到細胞后請盡快更換為含１５%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加１０%的血清，(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過７２小時)；２)貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑６cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)；３)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室。
貼壁細胞消化傳代時通常采用兩種方法：一、加入胰酶等細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；二、加入胰酶后，鏡下觀察待細胞始脫落時，棄胰酶，加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對細胞施加胰酶選擇，因為總是貼壁不牢的細胞先脫落，對腫瘤細胞來說，這部分細胞有可能是惡性程度較高的細胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，棄之，再加入適量胰酶作用１０s-４０s(根據(jù)細胞消化的難易程度)，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞，可以用２%利多卡因消化５-８分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對細胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點，直接加酶消化應該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后，用０.０４%的EDTA沖洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室溫孵育５min，棄取大部分EDTA，加入與剩余EDTA等量的胰酶(預熱)總體積１/１０v。消化到有細胞脫落。不過有人說EDTA對細胞不好，有證據(jù)嗎？培養(yǎng)的BASMC：倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶約６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和，并分瓶這種方法簡單、省事；效果很好并且不損失細胞！
最近在培養(yǎng)細胞時，發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好，很容易扎堆生長，用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來，很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的，傳代的第二天，有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢？你好，我養(yǎng)的細胞和你一樣，消化下來也是一團的，但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻，分皿后在鏡下看一看，移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕，避免晃動。細胞生長挺快，那么細胞的增殖能力應該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能：一、細胞消化后吹打不均勻，造成細胞成團生長：二、細胞細化太過，細胞成片脫落，吹打時沒有受力點，細胞聚團生長。解決辦法：根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化，將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內。貼壁細胞傳代培養(yǎng)：一般步驟為：真空泵吸走培養(yǎng)基，１XPBS漂洗兩次，加入１mlEDTA-Tripsin（１００mm皿為例），３７度放置數(shù)分鐘，輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量血清，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊，離心后加入新鮮培養(yǎng)基，按比例轉移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間，若胰酶處理太久，容易造成細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談談個人經驗：HepG-２、A５４９、Hela、SGC-７９０１幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理５-６min，C２C１２、COS-７、NIH-３T３比較容易脫落，２min足矣，P１９Cl６和２９３細胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
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