（石蠟切片需做抗原修復(fù)）
抗體反應(yīng)特點：
1.高度特異性，特異性是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征，特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合；
2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為：Ag+AbAg·Ab；
3.適當濃度和比例；
4.敏感性:在測定血清中某一物質(zhì)的含量時，化學比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。
抗體反應(yīng)的因素：
1.電解質(zhì) ：抗原抗體特異結(jié)合后，膠體粒便可發(fā)生脫水作用，此時易受電解質(zhì)影響，如有適當濃度的電解質(zhì)存在就會使它們失去部分負電荷而相互凝聚，于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)最適溫度。
含試劑：
1、一抗（應(yīng)用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 ）
2、無色試劑：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑
3、試劑A：封閉用正常山羊血清工作液
4、試劑B：生物素標記二抗工作液：生物素標記羊抗兔IgG
5、試劑C：辣根酶標記鏈酶卵白素工作液
6、顯色液D液 (棕色) 1ml
7、顯色液E液（白色）20ml
實驗步驟：
1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進行）。
3、3%雙氧水去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。
4、滴加試劑A（藍色液體）室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。
5、滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B（黃色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C（橙色液體），室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色（DAB 或AEC）
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要，可進行復(fù)染，脫水，透明。
14、選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?
6-CR110 [6-Carboxyrhodamine 110] *Single isomer* 6-羧基羅丹明110（單一化合物） 5 mg
5(6)-CR6G [5-(and 6)-Carboxyrhodamine 6G] *Mixed isomers* 5-(6)-羧基羅丹明6G（混合物） 25 mg
5-CR6G [5-Carboxyrhodamine 6G] *Single isomer* 5-羧基羅丹明6G（單一化合物） 5 mg
6-CR6G [6-Carboxyrhodamine 6G] *Single isomer* 6-羧基羅丹明6G（單一化合物） 5 mg
5(6)-CR6G, SE [5-(and 6)-Carboxyrhodamine 6G, succinimidyl ester] *Mixed isomers* 5-(6)-羧基羅丹明6G琥珀酰亞胺酯（混合物） 10 mg
5-CR6G, SE [5-Carboxyrhodamine 6G, succinimidyl ester] *Single isomer* 5-羧基羅丹明6G琥珀酰亞胺酯（單一化合物） 5 mg
6-CR6G, SE [6-Carboxyrhodamine 6G, succinimidyl ester] *Single isomer* 6-羧基羅丹明6G琥珀酰亞胺酯（單一化合物） 5 mg
5(6)-CR110, SE [5-(and 6)-Carboxyrhodamine 110, succinimidyl ester] *Mixed isomers* 5-(6)-羧基羅丹明110琥珀酰亞胺酯（混合物） 5 mg
5-CR110, SE [5-Carboxyrhodamine 110, succinimidyl ester] *Single isomer* 5-羧基羅丹明110琥珀酰亞胺酯（單一化合物） 5 mg
6-CR110, SE [6-Carboxyrhodamine 110, succinimidyl ester] *Single isomer* 6-羧基羅丹明110琥珀酰亞胺酯（單一化合物） 5 mg
5(6)-TAMRA [5-(and-6)-Carboxytetramethylrhodamine] *Mixed isomers* 5(6)-羧基四甲基羅丹明（混合物） 100 mg
5(6)-TAMRA [5-(and-6)-Carboxytetramethylrhodamine] *Mixed isomers* 5(6)-羧基四甲基羅丹明（混合物） 1 g
5(6)-TAMRA [5-(and-6)-Carboxytetramethylrhodamine] *Mixed isomers* 5(6)-羧基四甲基羅丹明（混合物） 5 g
5-TAMRA [5-Carboxytetramethylrhodamine] *Single isomer* 5-羧基四甲基羅丹明（單一化合物） 10 mg
5-TAMRA [5-Carboxytetramethylrhodamine] *Single isomer* 5-羧基四甲基羅丹明（單一化合物） 100 mg
5-TAMRA [5-Carboxytetramethylrhodamine] *Single isomer* 5-羧基四甲基羅丹明（單一化合物） 1 g
CXADR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
TGF-beta 1 / TGFB1 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
TGF-beta 1 / TGFB1 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
TGF-beta 1 / TGFB1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA WB IP 50 µg
CD10 / Neprilysin / MME 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
TGF-beta 1 / TGFB1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
TGF-beta 1 / TGFB1 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
PAX8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P IF ICC/IF 50 µg
FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM 25 Test
FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM 25 Test
CD95 / APO-1 / TNFRSF6 抗體, 鼠單抗 FCM 50 µg
FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µL
CD95 / APO-1 / TNFRSF6 / FAS 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
Complement C1s 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
Complement C1s 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
Leptin / LEP 抗體, 鼠單抗 ELISA WB IF ICC/IF 50 µg
Complement C1s 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
G-CSFR / CD114 / CSF3R 抗體, 鼠單抗 IF ICC/IF 50 µg
G-CSFR / CD114 / CSF3R 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM 25 Test
G-CSFR / CD114 / CSF3R 抗體, 鼠單抗 IF ICC/IF 50 µg
G-CSFR / CD114 / CSF3R 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
G-CSFR / CD114 / CSF3R 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM 25 Test
乙醛脫氫酶家族3成員A1抗體BCAM 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA WB IHC-P IP 50 µg
BCAM / CD239 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
CD40L / CD154 / TNFSF5 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
抗體的鑒定：
1）抗體的效價鑒定：不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴散試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2）抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計算交叉反應(yīng)率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3）抗體親和力：是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol?？贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。