"TT細胞：人甲狀腺髓樣癌細胞系
細胞背景資料：TT細胞由LeongSS等，自一位７７歲白人女性甲狀腺髓樣癌患者的穿刺活檢樣本中建立。TT細胞持續(xù)產生高水平的降血素和CEA。更換培養(yǎng)基后２４h和７２h，在培養(yǎng)基中檢測到的免疫活性的降血素濃度分別為３９００pg/１０６個細胞和７７００pg/１０６個細胞。７２小時后CEA積累濃度超過２７ng/１０６個細胞；該細胞最初是在RPMI１６４０培養(yǎng)液中培養(yǎng)，可產生神經肽，但還不知道在F１２培養(yǎng)液中培養(yǎng)是否會產生。
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：３-１：４傳代，每周換液２次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
養(yǎng)了幾年細胞，說一點自己培養(yǎng)細胞方面的看法：１)培養(yǎng)細胞前，可以看看細胞特點說明書，包括細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等；２)不同細胞生長周期不同，有的生長很快，比如說MDA-MB-２３１，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了，有的又是特別慢，等的人心焦，BT４７４就是，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿，所以就要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索了；３)對于嬌弱的細胞，就得細心呵護了，胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間，每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況；４)凍存細胞復蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基；５)培養(yǎng)箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次；６)養(yǎng)細胞的教訓：不能偷懶!細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。１)不管買的細胞、惠贈的細胞，剛拿到手趕緊做兩件事：檢測是否有支原體污染; 迅速擴增凍存；２)發(fā)現有污染迅速處理掉，特別是當你養(yǎng)了很多種細胞時; 細菌污染，真菌污染很容易發(fā)現，支原體污染的話，細胞會長的慢，買個支原體檢測的kit定期檢測一下；３)傳代細胞日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸；４)細胞的傳代一定要規(guī)律，保持相同的confluency和傳代時間間隔，不要隨心所欲或者拖延；５)注意個人衛(wèi)生。
細胞培養(yǎng)過程中，總是會出現各種意想不到的問題，一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法，希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助：1)觀察細胞狀態(tài)：貼壁細胞密度達到85-90%，即可以細胞凍存形式進行保藏，拍照，記錄細胞狀態(tài)；2)細胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當細胞剛開始脫落時，立即轉移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉移至培養(yǎng)箱內繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài)，至細胞成流沙狀完全脫落，轉移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細胞離心：將終止消化后的細胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細胞凍存：離心后去除細胞上清液，按照凍存細胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應的凍存管中，進行凍存；6)細胞保藏：凍存管做好標記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉移至-80℃超低溫冰箱過夜，將過夜后的凍存細胞轉移至液氮中保藏。
【懸浮型細胞的傳代操作】１)吸出細胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心１０００rpm ５分鐘；２)吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)?！咀⒁馐马棥浚?嚴格的無菌操作；２)適度消化：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化，一旦胞質回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。附：EDTA(０.０２％四乙酸二鈉)消化液配方：EDTA ０.２０g，NaCl ８.００g，KCl ０.２０g，KH２PO４ ０.０２g，葡萄糖 ２.００g，０.５％紅４ml，加入蒸餾水定容至１０００ml。１０磅２０min高壓滅菌，使用時調節(jié)PH值到７.４。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要徹底清洗，否則再培養(yǎng)時細胞容易脫壁。
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