"JVM-3 Thawing人慢性髓白血病細胞系
細胞背景資料：慢性髓白血病；女性
細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病細胞系
細胞生長：懸浮
細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升高到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病細胞系
細胞生長特性：懸浮
細胞培養(yǎng)過程中相關問題總結：懸浮性細胞應如何繼代處理？一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉(zhuǎn)速？欲回收動物細胞，其離心速率一般為３００xg(約１,０００rpm)，５-１０分鐘，過高之轉(zhuǎn)速，將造成細胞死亡；細胞之接種密度為何？依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因；細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成；DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？冷凍保存使用之DMSO等級，必須為Tissue culture grade之DMSO，其本身即為無菌狀況，次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于４°C，避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜；冷凍保存細胞之方法？冷凍保存方法一：冷凍管置于４°C ３０~６０分鐘→ (-２０°C ３０分鐘)→-８０°C １６~１８小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-２０°C不可超過１小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內(nèi)應有多少細胞濃度？冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤細胞則以５x１０(６)cells/ml vial為宜；應如何避免細胞污染？細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法；如果細胞發(fā)生微生物污染時，應如何處理？直接滅菌后丟棄之。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
HeLaS3細胞系相關產(chǎn)品：KP-N-RT-BM細胞、HCC0202細胞、AC29細胞
HUVEC細胞系相關產(chǎn)品：QG-56細胞、HCC0078細胞、CL1-5細胞
Jurkat E6細胞系相關產(chǎn)品：JHH-2細胞、P3J-HR-1細胞、MOLM13細胞
F81細胞系相關產(chǎn)品：UPCI-SCC-90細胞、Natural Killer-92細胞、BHK21細胞
HR8348細胞系相關產(chǎn)品：DHL10細胞、LS174T細胞、DMS153細胞
RD-2細胞系相關產(chǎn)品：Hs 675.T細胞、MDA453細胞、MES-13細胞
Hs 840.T細胞系相關產(chǎn)品：SUIT-2細胞、HCC-2279細胞、Human Liver-7702細胞
AtT 20細胞系相關產(chǎn)品：HN13細胞、A549/ATCC細胞、MCF7/WT細胞
SK-MEL-3細胞系相關產(chǎn)品：HBZY-1細胞、GM07404D細胞、Strain L-929細胞
Mv1.Lu細胞系相關產(chǎn)品：MDA-MB-361細胞、H1975細胞、P3X63細胞
32D clone 3細胞系相關產(chǎn)品：A875細胞、MDA231-LM2細胞、N-9細胞
AMO1細胞系相關產(chǎn)品：RKO-AS-45-1細胞、MHCC 97-L細胞、OPM2細胞
SK_N_FI細胞系相關產(chǎn)品：UMUC1細胞、SUDHL4細胞、HMC-1細胞
NCI/ADRRES細胞系相關產(chǎn)品：118 MG細胞、WiDr/S細胞、ACCM細胞
CAL-148細胞系相關產(chǎn)品：253J-Bladder-V細胞、Soleus clone 8細胞、ECC-10細胞
IEC 18細胞系相關產(chǎn)品：H865細胞、DMS273細胞、RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細胞
H735細胞系相關產(chǎn)品：Hs 934.T細胞、IPLB-Sf21AE細胞、CAL 12細胞
Hs706T細胞系相關產(chǎn)品：SR786細胞、JC細胞、Panc02細胞
EA hy 926細胞系相關產(chǎn)品：GM00637B細胞、SUDHL-6細胞、HS-68細胞
HS 683T細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H522細胞、U266細胞、3T3-Swiss細胞
293GP細胞系相關產(chǎn)品：BT.549細胞、H-23細胞、R3/1細胞
Simpson細胞系相關產(chǎn)品：RERFLCMS細胞、TE-9細胞、UMRC-2細胞
C4-I細胞系相關產(chǎn)品：BpRc1細胞、D-341 Med細胞、Hs 888.Lu細胞
SCL II細胞系相關產(chǎn)品：IBRS-2細胞、HO-8910細胞、J774.A1細胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細胞系相關產(chǎn)品：AGS細胞、P388.D1細胞、P3X63 AG8-653細胞
FBHE細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1781細胞、A2780/CP細胞、MHCC97L細胞
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病細胞系
LNT-229細胞系相關產(chǎn)品：H1435細胞、MAVER-1細胞、C-33A細胞
AAV-293細胞系相關產(chǎn)品：P19細胞、A1847細胞、HECV細胞
Panc203細胞系相關產(chǎn)品：SCH細胞、HCASMC細胞、Human podocyte細胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細胞系相關產(chǎn)品：NHEK細胞、T-HEECs細胞、SV40-MES13細胞
MF2059細胞系相關產(chǎn)品：WM266mel細胞、HBL 100細胞、SU.86細胞
PANC-02-03細胞系相關產(chǎn)品：HEK-293-EBNA細胞、MSTO211H細胞、MeWo細胞
FHL124細胞系相關產(chǎn)品：GCT0404細胞、MADISON LUNG TA-109細胞、HeLa-229細胞
MHCC97細胞系相關產(chǎn)品：SK N SH細胞、BPH1細胞、LN299細胞
IEC6細胞系相關產(chǎn)品：HEK 293-EBNA細胞、COR-L23細胞、ME-180細胞
A375mel細胞系相關產(chǎn)品：SKLMS-1細胞、SGC-7901細胞、JHH2細胞
PLB985細胞系相關產(chǎn)品：Pro-5WgaRI3C細胞、P30-OHKUBO細胞、Panc-05.04細胞
MDA-157細胞系相關產(chǎn)品：SJ-RH30細胞、HES [Human embryonic skin fibroblast]細胞、NCIH820細胞
OCI-AML4細胞系相關產(chǎn)品：HCC-94細胞、F36P細胞、Colo320細胞
Ra No. 1細胞系相關產(chǎn)品：Hs 852.T細胞、Li-7細胞、TCC-SUP細胞
GA-10細胞系相關產(chǎn)品：NIH3T3-L1細胞、HIEC-6細胞、K1細胞
H-1435細胞系相關產(chǎn)品：YD15細胞、H-2135細胞、OCI/AML2細胞
H3255_DA細胞系相關產(chǎn)品：HCS2/8細胞、KPL-4細胞、OCI Ly3細胞
KE-39細胞系相關產(chǎn)品：Hs706T細胞、SUP-B1細胞、T47D:A細胞
NCI-H1838細胞系相關產(chǎn)品：A3細胞、Strain V細胞、B16細胞
HEL-92細胞系相關產(chǎn)品：Hs 737.T細胞、NCIH1184細胞、PT-K75細胞
H2171細胞系相關產(chǎn)品：LS513細胞、293T/17細胞、HSC-4細胞
H-774細胞系相關產(chǎn)品：GM00637細胞、SKNBE細胞、GB-1細胞
LAPC4細胞系相關產(chǎn)品：EVSAT細胞、SNU886細胞、Bovine ENDometrial cells細胞
NCIH1975細胞系相關產(chǎn)品：SW 480細胞、Tb 1 Lu細胞、ME-1 [Human leukemia]細胞
AN-3細胞系相關產(chǎn)品：U373MG細胞、COLO 320細胞、HCM細胞
THP-1(ATCC)細胞系相關產(chǎn)品：J.E6-1細胞、BLO-11細胞、Vero 76細胞
HuPT3細胞系相關產(chǎn)品：LU165細胞、624-mel細胞、COLO-738細胞
NCIH1915細胞系相關產(chǎn)品：SW260細胞、293細胞、MDA 435細胞
Porcine Kidney-13細胞系相關產(chǎn)品：H-1048細胞、P3HRI細胞、HPAF II細胞
RPMI 7951細胞系相關產(chǎn)品：X63.Ag8.653細胞、BEAS 2B細胞、SU-DHL-4細胞
TMD-8細胞系相關產(chǎn)品：293-FT細胞、SKNBE-2細胞、CEM-0細胞
TCam 2細胞系相關產(chǎn)品：COLO-320-HSR細胞、OCI-Ly 7細胞、LNT-229細胞
Hs840_T細胞系相關產(chǎn)品：LIXC002細胞、578T細胞、EoL-1 cell細胞
JVM-3 Thawing人慢性髓白血病細胞系
SNU-620細胞系相關產(chǎn)品：DoHH2細胞、NPC-TW01細胞、NCIH1435細胞
COLO824細胞系相關產(chǎn)品：U87MG細胞、G422細胞、H146細胞
CAL 85-1細胞系相關產(chǎn)品：Intestinal Epithelioid Cell line No. 18細胞、HIBEpiC細胞、SCC-7細胞
SMMC 7721細胞系相關產(chǎn)品：EBNA293細胞、NCIH1792細胞、H2347細胞
OAW 42細胞系相關產(chǎn)品：RMG-I細胞、ME-180細胞、RPMI no 8226細胞
Cates-1B細胞系相關產(chǎn)品：BHK 21細胞、AAV-293細胞、DC 2.4細胞
28SC細胞系相關產(chǎn)品：CCC-ESF-1細胞、HEC1A細胞、COLO201細胞
AR4-2J細胞系相關產(chǎn)品：Epithelioma Papulosum Cyprini細胞、HNEpC細胞、HS0578T細胞
FLC7細胞系相關產(chǎn)品：GM00346B細胞、OVCAR8細胞、Nb2細胞
Y 1細胞系相關產(chǎn)品：MESSA/Dx5細胞、U-251-MG細胞、P3J HR-1細胞
OCUM-1細胞系相關產(chǎn)品：MDA-MB-157細胞、NCI-H1666細胞、HEK (AD293)細胞
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