"HET-1A Thawing人食管上皮細胞系
細胞背景資料：食管；上皮細胞；SV４０轉(zhuǎn)化；男性
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
HET-1A Thawing人食管上皮細胞系
細胞生長：貼壁
培養(yǎng)細胞真的不難，最關鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞復蘇相關注意事項：１.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結(jié)果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
HET-1A Thawing人食管上皮細胞系
細胞生長特性：貼壁
血清必須貯存于–２０～-７０℃，若存放于４℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將４０～４５ml分裝于無菌５０ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約１０%，必須預留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(５００ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：-２０℃或–７０℃至４℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以５０ml無菌離心管可分裝４０～４５ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于３７℃太久，若在３７℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成，這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物，可用離心３０００rpm，５min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在３７℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但在３７℃環(huán)境下，又會使此沈淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點應不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應立即停用，更換另一批號的血清。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
MESSA Dx5細胞系相關產(chǎn)品：PASMCS細胞、CCD19-Lu細胞、U251細胞
EAhy 926細胞系相關產(chǎn)品：SU86_86細胞、SK-MES-1細胞、huH 1細胞
9L細胞系相關產(chǎn)品：ZYM-DIEC02細胞、Homo sapiens No. 578, tumor cells細胞、HCC1008細胞
P30 OHK細胞系相關產(chǎn)品：Ly1細胞、M-1細胞、SK-MEL-31細胞
GES1細胞系相關產(chǎn)品：HEK293FT細胞、Hs832.Tc細胞、MG-HU-3細胞
NHA細胞系相關產(chǎn)品：MPP-89細胞、CNE細胞、NIE 115細胞
TCC-PAN2細胞系相關產(chǎn)品：Suzhou Human Glioma-44細胞、LMH細胞、IOSE-Van細胞
WIL2 Secreting細胞系相關產(chǎn)品：H-441細胞、SNU-1細胞、Human fetal lung fibroblast 1細胞
WiDr細胞系相關產(chǎn)品：HPAF細胞、TOV-112細胞、L cell細胞
GM03190A細胞系相關產(chǎn)品：A-253細胞、Fu97細胞、TEC細胞
LS174細胞系相關產(chǎn)品：HIBEC細胞、33604細胞、H1838細胞
HCC-1171細胞系相關產(chǎn)品：MCF-10A細胞、LNCaP.FGC細胞、FDC-P1細胞
H-1930細胞系相關產(chǎn)品：PaCa2細胞、HS-294-T細胞、253J-BV細胞
BpRc1細胞系相關產(chǎn)品：hTERT-HME1細胞、H1048細胞、IM-9細胞
RS4-11細胞系相關產(chǎn)品：H1688細胞、SW1990細胞、SSP-25細胞
SNU638細胞系相關產(chǎn)品：NIH:OVCAR3細胞、CCD-841-CoTr細胞、COR L279細胞
OK-WT細胞系相關產(chǎn)品：BBE細胞、AML-193細胞、PLA-801C細胞
HEC-1A細胞系相關產(chǎn)品：Oka-C1細胞、SK Col 1細胞、OEC33細胞
MADB 106細胞系相關產(chǎn)品：HCT FET細胞、KMS18細胞、KMS18細胞
C26細胞系相關產(chǎn)品：LS123細胞、TNC-1B12B4細胞、H9c2細胞
SKLU01細胞系相關產(chǎn)品：WM 239細胞、MM-1S細胞、ATDC-5細胞
SKLU01細胞系相關產(chǎn)品：WM 239細胞、MM-1S細胞、ATDC-5細胞
Hs746T細胞系相關產(chǎn)品：CEMC1細胞、TE-6細胞、U-87細胞
Bovine Turbinate細胞系相關產(chǎn)品：MARC-145細胞、TCC-PAN2細胞、RPMI-1846細胞
RPMI-6666細胞系相關產(chǎn)品：SKG3A細胞、MC-116細胞、Madin-Darby Bovine Kidney細胞
BC-PAP細胞系相關產(chǎn)品：NMCG-1細胞、QG56細胞、WM 239A細胞
HET-1A Thawing人食管上皮細胞系
2BS細胞系相關產(chǎn)品：alphaTC1 Clone 6細胞、NCI-H2030細胞、H69細胞
CCC-HSF-1細胞系相關產(chǎn)品：McArdle RH-7777細胞、UMNSAH-DF-1細胞、2780細胞
UPCI:SCC154細胞系相關產(chǎn)品：PTK1細胞、Lu99A細胞、HSC3細胞
L 540細胞系相關產(chǎn)品：JKT1細胞、RWPE-2細胞、UACC 893細胞
WM239細胞系相關產(chǎn)品：GM03320D細胞、SNU-423細胞、TU 686細胞
SW 626細胞系相關產(chǎn)品：LC-1/sq細胞、HK-2 [Human kidney]細胞、159 PT細胞
MDA-MB-453細胞系相關產(chǎn)品：H-2444細胞、C57 Mouse Tumor 64細胞、HS-729細胞
HGSMC細胞系相關產(chǎn)品：TE12細胞、RC92A細胞、NCI H82細胞
NCI-A549細胞系相關產(chǎn)品：M14-MEL細胞、AdHek細胞、U266 Bl細胞
BC-PAP細胞系相關產(chǎn)品：NMCG-1細胞、QG56細胞、WM 239A細胞
LED-WiDr細胞系相關產(chǎn)品：SVOG細胞、H1404細胞、ARO-81細胞
CL1.0細胞系相關產(chǎn)品：COR-L 105細胞、M14-MEL細胞、MMAc-Serum Free細胞
Hs68細胞系相關產(chǎn)品：DMS 114細胞、OCI-LY-1細胞、M21細胞
H2405細胞系相關產(chǎn)品：BALL-1細胞、C3H/10T1/2 CL8細胞、P3 NS1 Ag4細胞
SKRC-42細胞系相關產(chǎn)品：H-1618細胞、Ra No. 1細胞、NK-92MI細胞
SCC 25細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1650細胞、hESC細胞、PAN 02細胞
BC3H1細胞系相關產(chǎn)品：T9細胞、OC 316細胞、NS-20Y細胞
KS-1 [Human glioblastoma]細胞系相關產(chǎn)品：BEL 7405細胞、BC-021細胞、TE-7細胞
C8166細胞系相關產(chǎn)品：T 84細胞、Pa17C細胞、L-929細胞
NCI-H2029細胞系相關產(chǎn)品：Ku812細胞、P30 OHK細胞、SK-NEP-1細胞
BC3H-1細胞系相關產(chǎn)品：769P細胞、ETCC007細胞、GEO細胞
ARO-81細胞系相關產(chǎn)品：CT-26細胞、RCC4細胞、SK-N-BE(1)細胞
H2135細胞系相關產(chǎn)品：HCC-1143細胞、Pa14C細胞、OCI-Ly19細胞
Z310細胞系相關產(chǎn)品：NCI660細胞、NCI-H2122細胞、TE354.T細胞
LA-795細胞系相關產(chǎn)品：NR 8383細胞、HTori 3細胞、DHL6細胞
T98細胞系相關產(chǎn)品：SUPB-15細胞、CF PAC-1細胞、MV-4-11細胞
NHDF細胞系相關產(chǎn)品：CAL 33細胞、UCLA-SO-M21細胞、D341 Med細胞
YTMLC-90細胞系相關產(chǎn)品：ONS76細胞、CEM.C1細胞、Transformed C3H Mouse Kidney-1細胞
BEL7402細胞系相關產(chǎn)品：Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS細胞、2PK3細胞、Potorous tridactylus Kidney 2細胞
RIN Cl-5F細胞系相關產(chǎn)品：SNB19細胞、HCC9204細胞、GM15452細胞
ME 180細胞系相關產(chǎn)品：RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細胞、RD 2細胞、IR 983F細胞
SKGT2細胞系相關產(chǎn)品：Hs 895 T細胞、SK LU 1細胞、TE 32細胞
BEP2D細胞系相關產(chǎn)品：HuT102細胞、HFL-I細胞、LS-1034細胞
HET-1A Thawing人食管上皮細胞系
H-2110細胞系相關產(chǎn)品：RCC 786-O細胞、Hs-729-T細胞、WC00079細胞
PGLH7細胞系相關產(chǎn)品：CHL-11細胞、293 EBNA細胞、OACP4C細胞
GM-637細胞系相關產(chǎn)品：BL1339細胞、CHAGOK1細胞、AsPC-1細胞
SACC83細胞系相關產(chǎn)品：BMSCs（mBMSCs）細胞、MLMA細胞、SF17細胞
A20細胞系相關產(chǎn)品：HNE2細胞、HME1細胞、95C細胞
RCCJF細胞系相關產(chǎn)品：HSC-1細胞、UMUC1細胞、CLONE M3細胞
CMT.64細胞系相關產(chǎn)品：Mv.1.Lu細胞、NCI-H2135細胞、Mel-RM細胞
ketr 3細胞系相關產(chǎn)品：HTSMC細胞、Granta-519細胞、OVCAR 4細胞
H157細胞系相關產(chǎn)品：CCRF-CEM C1細胞、NCIH1048細胞、NCIH841細胞
MCAEC細胞系相關產(chǎn)品：GM15452細胞、293T細胞、McA-RH 7777細胞
TE-3A細胞系相關產(chǎn)品：COLO 741細胞、GM06141B細胞、SuperTube細胞
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