"WISH Thawing人羊膜細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料:最初以為這株細(xì)胞的起源是正常羊膜,但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋法分析,證實該細(xì)胞是HeLa細(xì)胞污染的;角蛋白陽性。
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
WISH Thawing人羊膜細(xì)胞系
細(xì)胞生長:貼壁
常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會有脫落?因為運(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法:1:2-1:4傳代,每周2-3次。
正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項:細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時收獲細(xì)胞,計數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實,細(xì)胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。
細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
WISH Thawing人羊膜細(xì)胞系
細(xì)胞生長特性:貼壁生長
細(xì)胞傳代的一般方法:開始細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬單位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細(xì)胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、-20℃冰箱;操作步驟:鏡檢細(xì)胞,挑選生長狀態(tài)良好,細(xì)胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細(xì)胞;先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶內(nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定);填寫傳代記錄。
細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣
P3J HR-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02219C細(xì)胞、NCI.H23細(xì)胞、MDA-MB-231-luc細(xì)胞
MHCC97-L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKCO1細(xì)胞、SACC83細(xì)胞、NCI-H2126細(xì)胞
UM2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pt K1 (NBL-3)細(xì)胞、MDA-MB-435S細(xì)胞、Molm 14細(xì)胞
H1648細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFSF細(xì)胞、Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1細(xì)胞、HBE細(xì)胞
Human Epidermoid carcinoma #2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1569細(xì)胞、NBL-4細(xì)胞、NS20Y細(xì)胞
SUDHL-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCC-MSB-1細(xì)胞、HPAC細(xì)胞、MDA-MB415細(xì)胞
NB1-RGB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D10.G4.1細(xì)胞、SW 1116細(xì)胞、C-4 I細(xì)胞
H-1672細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC3M細(xì)胞、Calu-3細(xì)胞、SK MEL 28細(xì)胞
H9c2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU_145細(xì)胞、HOS(TE85)細(xì)胞、FOX-NY細(xì)胞
SW 837細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2122細(xì)胞、NCM-460細(xì)胞、Kasumi-1細(xì)胞
SUD6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1623細(xì)胞、RCS細(xì)胞、Walker-256-TC細(xì)胞
H-1819細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:5637細(xì)胞、SKNDZ細(xì)胞、OCI-Ly3細(xì)胞
MCF12F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hs 68細(xì)胞、MGc80-3細(xì)胞、TM4細(xì)胞
IM95細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CORL279細(xì)胞、Nakata-1細(xì)胞、Panc_04_03細(xì)胞
MGH-U3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-K8細(xì)胞、GTL 16細(xì)胞、MIA PaCa-2細(xì)胞
GC-1 spg細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H3255細(xì)胞、BE2M17細(xì)胞、P3JHR1細(xì)胞
MDCC-MSB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GA10細(xì)胞、CHO Lec1細(xì)胞、KE-37細(xì)胞
DK-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-12T細(xì)胞、NRCC細(xì)胞、OCI-LY-18細(xì)胞
NCI-H2452細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL28細(xì)胞、L1210細(xì)胞、SCC-4細(xì)胞
BHK-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGP 1細(xì)胞、U266-B1細(xì)胞、SUM-190細(xì)胞
NS1/1-Ag4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JEG-3細(xì)胞、SW 839細(xì)胞、MCF-7ADR細(xì)胞
NS1/1-Ag4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JEG-3細(xì)胞、SW 839細(xì)胞、MCF-7ADR細(xì)胞
MonoMac 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-231-luc細(xì)胞、LA795細(xì)胞、AMC-HN-8細(xì)胞
HCC-1599細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B/C3T3細(xì)胞、HBEpiC細(xì)胞、Human ErythroLeukemia細(xì)胞
16-HBE14o細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SN12-PM6細(xì)胞、HEC1-B細(xì)胞、P-388D1細(xì)胞
SK-ML2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COR L279細(xì)胞、Sp2/0-Ag14細(xì)胞、J 111細(xì)胞
WISH Thawing人羊膜細(xì)胞系
SNK1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1882細(xì)胞、NCI-H847細(xì)胞、Human Hepatocyte Line 5細(xì)胞
TC-1[JHU-1]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI/AML5細(xì)胞、BEL/FU細(xì)胞、MLA 144細(xì)胞
M-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEEpiC細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-415細(xì)胞、RPMI7951細(xì)胞
RPMI-6666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKG3A細(xì)胞、MC-116細(xì)胞、Madin-Darby Bovine Kidney細(xì)胞
SCCVII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-373MG ATCC細(xì)胞、Vx-2細(xì)胞、SiHa細(xì)胞
Hs934T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit-225-K6細(xì)胞、hRPTC細(xì)胞、HEK293F細(xì)胞
COLO 824細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY-270細(xì)胞、NP-69細(xì)胞、HEK293-EBNA細(xì)胞
H716細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo16細(xì)胞、BRL 3A細(xì)胞、NCI-H1666細(xì)胞
SW1783細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-GEO細(xì)胞、HuH-1細(xì)胞、LNCaP-C4-2細(xì)胞
Hs 281.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-320-DM細(xì)胞、NCM460細(xì)胞、ARH-77細(xì)胞
LNCaP C4-2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EB1細(xì)胞、HCE細(xì)胞、MAD109細(xì)胞
RIN14B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFSC-8B細(xì)胞、SCC-15細(xì)胞、LC-1-sq細(xì)胞
L-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L02細(xì)胞、ATN-1細(xì)胞、HOS-143B細(xì)胞
A549-Taxol細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLM細(xì)胞、KYSE410細(xì)胞、LNCaP-Clone-FGC細(xì)胞
CCD19Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kasumi-1細(xì)胞、McA-RH7777細(xì)胞、Kit-225細(xì)胞
OSC-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2_C細(xì)胞、MDA 1386細(xì)胞、CL 1-0細(xì)胞
NCI-SNU-475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-02-03細(xì)胞、Madison細(xì)胞、BHP-10細(xì)胞
PC-3/M細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:184A1細(xì)胞、NCM356細(xì)胞、H1155細(xì)胞
L(TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC57G細(xì)胞、SUNE-1細(xì)胞、RKO-AS-45-1細(xì)胞
A2780CP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK6細(xì)胞、HRIF細(xì)胞、H508細(xì)胞
OVSAHO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-266-mel細(xì)胞、Hs683T細(xì)胞、UWB1.289+BRCA1細(xì)胞
MMQ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Potorous tridactylus Kidney 2細(xì)胞、PANC0504細(xì)胞、EBTr (NBL-4)細(xì)胞
LN 382細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-FI細(xì)胞、T98G細(xì)胞、HuNS1細(xì)胞
RWPE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Walker-256細(xì)胞、mIMCD3細(xì)胞、P3-X63-Ag8.653細(xì)胞
AML-12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL 299細(xì)胞、H1672細(xì)胞、CEF細(xì)胞
RCC-JF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUVEC-C[HUVEC]細(xì)胞、T47D細(xì)胞、EFM19細(xì)胞
EOC20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COV-434細(xì)胞、AgC11x3A細(xì)胞、Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞
HFT8810細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MV 3細(xì)胞、Bac12F5細(xì)胞、CCD1095Sk細(xì)胞
BALB/3T3 clone A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO-ori細(xì)胞、RC-2細(xì)胞、LS-174細(xì)胞
NCI-H1770細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKGIIIA細(xì)胞、HuH28細(xì)胞、TK.10細(xì)胞
A 72細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AC29細(xì)胞、SW-579細(xì)胞、UPCISCC154細(xì)胞
HS 683T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H522細(xì)胞、U266細(xì)胞、3T3-Swiss細(xì)胞
KASUMI1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:9L細(xì)胞、Tca-8113細(xì)胞、NCI-H295R細(xì)胞
WISH Thawing人羊膜細(xì)胞系
AR4-IP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S3 HeLa細(xì)胞、Scott and White No. 13細(xì)胞、Rat Fetal Lung-6細(xì)胞
NH-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNBE-2細(xì)胞、HS0578T細(xì)胞、SK-MES1細(xì)胞
NCIH2135細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-SA-Dx5細(xì)胞、OE-21細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-468細(xì)胞
LC2/Ad細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCM1細(xì)胞、McG-1細(xì)胞、Hep II細(xì)胞
L M (TK-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UT-7細(xì)胞、FRTL-5細(xì)胞、58F細(xì)胞
SV40 MES 13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DITNC1細(xì)胞、OCI-Ly 10細(xì)胞、HCC-95細(xì)胞
2PK3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH 3T6細(xì)胞、Lewis-Lung細(xì)胞、NTERA2D1細(xì)胞
786-0細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH716細(xì)胞、TOG細(xì)胞、NCIH2291細(xì)胞
Tn 5B1-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2029細(xì)胞、OV1/P細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞
H211細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA-SO-M21細(xì)胞、HCa/16A3-F細(xì)胞、HGE細(xì)胞
Hs 636 T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNG-M細(xì)胞、Hs.27細(xì)胞、A-101D細(xì)胞
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