"Jiyoye Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對細(xì)胞的損傷等等。 UMRC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D/cl3細(xì)胞、Malme3M細(xì)胞、HBZY-1細(xì)胞 NCI H2106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPLB-SF-21細(xì)胞、Human podocyte細(xì)胞、TE671/RD細(xì)胞 293 H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC5細(xì)胞、NCI-H2291細(xì)胞、H-125細(xì)胞 細(xì)胞生長:懸浮 Jiyoye Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:每周2-3次。 SK ES 01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN45細(xì)胞、PSN-1細(xì)胞、NCI-H1385細(xì)胞 RMS 1598細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC 61.5.3細(xì)胞、JJN-3細(xì)胞、NCIH1693細(xì)胞 H838細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:E.G7-OVA細(xì)胞、Hs 600.T細(xì)胞、AML-2細(xì)胞 RSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DH-L5細(xì)胞、TKB1細(xì)胞、UWB1.289細(xì)胞 JAR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SkChA-1細(xì)胞、BL1339細(xì)胞、HEL-92.1.7細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Jiyoye Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 HEL299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKOV3細(xì)胞、SK.OV.3細(xì)胞、TGBC11T細(xì)胞 Tu177細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMT64細(xì)胞、Mhh-Call 2細(xì)胞、HPDE細(xì)胞 Colon 38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL-31細(xì)胞、Ls-174-T細(xì)胞、SkMel31細(xì)胞 hRPTC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC0504細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-9細(xì)胞、KCL-22細(xì)胞 RF/6A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-29/CX-1細(xì)胞、RGM1細(xì)胞、LU65細(xì)胞 HCC95細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RN-c細(xì)胞、Neuro-2a細(xì)胞、SV-HUC細(xì)胞 HONE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PG-4 S+L-細(xì)胞、GM05372E細(xì)胞、H1522細(xì)胞 HUT 28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1666細(xì)胞、SNU-475細(xì)胞、MEG-01細(xì)胞 NCIH1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AU-565細(xì)胞、H498細(xì)胞、H-847細(xì)胞 6-10B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ChA-1細(xì)胞、OVCA8細(xì)胞、SU-86-86細(xì)胞 Jiyoye Lymphoblastoid cells人B淋巴細(xì)胞系 NCIH1876細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OP-9細(xì)胞、HO1-N1細(xì)胞、NCI H2106細(xì)胞 PBL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H35細(xì)胞、RAW 264.7細(xì)胞、MA-782細(xì)胞 NCI H295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1092細(xì)胞、RERFLCMS細(xì)胞、SUIT2細(xì)胞 PK13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MIA PaCa-2細(xì)胞、MM1S細(xì)胞、BEAS-2B細(xì)胞 TPC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OUMS23細(xì)胞、D407 RPE細(xì)胞、RTE細(xì)胞 P3J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW48細(xì)胞、P3-x63-Ag8 653細(xì)胞、CHOK1細(xì)胞 P3J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW48細(xì)胞、P3-x63-Ag8 653細(xì)胞、CHOK1細(xì)胞 LS 513細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H292細(xì)胞、Molm14細(xì)胞、XuanWei Lung Cancer-05細(xì)胞 TE-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS-79細(xì)胞、MCF/Adr細(xì)胞、ECC10細(xì)胞 H-1299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T98G細(xì)胞、P116細(xì)胞、MFE 296細(xì)胞 K7M2 wt細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caov-4細(xì)胞、J-774A.1細(xì)胞、Jeko1細(xì)胞 WiDrTC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-251細(xì)胞、H-1954細(xì)胞、CHO-K1細(xì)胞 Ramos 2G6 4C10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-04-03細(xì)胞、TE-85細(xì)胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞 WERI-Rb-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDLM-2細(xì)胞、RT112細(xì)胞、UM-UC-1細(xì)胞 WRL-68細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS411細(xì)胞、MeT-5A細(xì)胞、SUDHL-5細(xì)胞 MV-4:11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-159-PT細(xì)胞、FHs74 Int細(xì)胞、H-1755細(xì)胞 HUVEC-C[HUVEC]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:N1S1細(xì)胞、M-07e細(xì)胞、Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D細(xì)胞 HS578細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAMA-1細(xì)胞、SCCVII/St細(xì)胞、MT-3 [Human leukocytes]細(xì)胞 HCV-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:E.L.4細(xì)胞、NCI-H-295細(xì)胞、Hmy.2 CIR細(xì)胞 Meat Animal Research Center-145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hu-P-T3細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞、CCD-841-CoN細(xì)胞 RCC-10RGB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caco-2細(xì)胞、HCC0038細(xì)胞、NHLF細(xì)胞 NBLAN5T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KFB細(xì)胞、HEL-299細(xì)胞、CEK細(xì)胞 NTERA-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCMK1細(xì)胞、FD-LSC-1細(xì)胞、NCI-H378細(xì)胞 OACP4 C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1581細(xì)胞、LLCPK1細(xì)胞、MOLT4細(xì)胞 293S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL-34細(xì)胞、LC1sq細(xì)胞、RBL-2H3細(xì)胞 C-Li-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-780細(xì)胞、SJSA1細(xì)胞、KU 812F細(xì)胞 NRK52E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1500細(xì)胞、SK-MEL-2細(xì)胞、SKNEP1細(xì)胞 H-1385細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WIL2 Secreting細(xì)胞、H125細(xì)胞、Bat lung細(xì)胞 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