"Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細胞系 細胞背景資料:脈絡(luò)從;上皮;SV40永生化;SD大鼠 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復(fù)蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 DHL-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS-1細胞、CAL-51細胞、PTK 2細胞 Leukemic 1210細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2108細胞、H-1693細胞、Co320細胞 FDC-P1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMT-93細胞、NCTC clone 929細胞、COLO 829細胞 細胞生長:貼壁 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞的凍存:為避免污染造成的損失,最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前,細胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培養(yǎng)基;包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基;50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基或50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:50%細胞條件無血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存:計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。以1×10(7)到5×10(7)細胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在無血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細胞。分裝進凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存:使用分離試劑從基層分離細胞,分離時盡可能溫和,使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細胞,確定有活力細胞數(shù)。以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。以5×10(6)到1×10(6)細胞/ml密度,在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 CCLP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細胞、CORL51細胞、A20細胞 H-748細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel624細胞、MARC 145細胞、SK-RC 39細胞 Hs-274-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GI-1細胞、HeLa S-3細胞、Pfeiffer細胞 Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QBC(939)細胞、JB 6細胞、HIT T15細胞 HCC70細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1819細胞、KHYG-1細胞、MCF-10 Attached細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復(fù)蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 TE7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1417細胞、CPA 47細胞、UM-UC-14細胞 RL-65細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U266S細胞、MNNG-HOS (Cl#5)細胞、MDA468細胞 MRASMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tohoku Hospital Pediatrics-1細胞、EC9706細胞、CCD-18Co細胞 GOTO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MTC-TT細胞、OV 1063細胞、KRC-Y細胞 NCI-H676B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J82細胞、CPAE細胞、A-427細胞 NCI-H2195細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細胞、HEK 293 EBNA細胞、VMCUB1細胞 CAL78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE-296細胞、Hs 737.T細胞、OEC19細胞 MonoMac1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-3細胞、95C細胞、C38細胞 Nittby-Salford 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FAK+/+細胞、H-1522細胞、Dx5細胞 IPLB-Sf21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-2008細胞、HNTEC細胞、KYSE-510細胞 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細胞系 MNNG-HOS (Cl#5)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31-FUJ細胞、HCGC細胞、Hi-5細胞 SU-86-86細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCA 7細胞、NCIH820細胞、OVCA8細胞 NCI-H2108細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 684細胞、D6P2T細胞、University of Arizona Cell Culture-893細胞 CCD841CoTr細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-72細胞、MFM223細胞、U-343細胞 DH-82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-03-27細胞、CMT167細胞、BC-009細胞 BHP-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 2細胞、FCCH1018細胞、OE33細胞 BHP-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 2細胞、FCCH1018細胞、OE33細胞 Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs822T細胞、SNU-449細胞、U266 B1細胞 HFT 8810細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-85-1細胞、MPC 11細胞、HEC-151細胞 CCRF/CEM/0細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9c2(2-1)細胞、HCC-1419細胞、H661細胞 TGBC-11-TKB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI7951細胞、J82 COT細胞、LC-1 sq細胞 INS1-E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA801-95D細胞、WEHI 3B細胞、COLO 699細胞 OAW-42細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNDZ細胞、Granta519細胞、NCIH2085細胞 Tb1Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-774細胞、SUM-52細胞、BE(2)C細胞 MV-4:11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-159-PT細胞、FHs74 Int細胞、H-1755細胞 ARH-77細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RFL-6細胞、NCI-N87細胞、HEK/EBNA細胞 SNU-878細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HR8348細胞、OCI-Ly 1細胞、NCI-SNU-878細胞 NCI-841細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AML-2細胞、Rat1細胞、LS180細胞 P3HRI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL I細胞、CCF-STTG1細胞、MDST8細胞 NOZAWA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ME180細胞、NCI-SNU-878細胞、HepaRG細胞 CEF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A細胞、343 MG細胞、MALME 3M細胞 KS-SLK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-668細胞、Mink Lung細胞、Nthy-ori 3-1細胞 BALB/3T3 clone A31細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO-ori細胞、RC-2細胞、LS-174細胞 COR-L 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HCS2/8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUSM-1細胞、CHP126細胞、H-2227細胞 EB3 [Human Burkitt lymphoma]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Okayama University Medical School-27細胞、H929細胞、SW480E細胞 COS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OACP4C細胞、H-2172細胞、CL-34細胞 HEK-293FT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16F10細胞、Jiyoye(P-2003)細胞、High 5細胞 H2227細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARPE19細胞、TW01細胞、COLO 741細胞 EB2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CX1細胞、786O細胞、NCIH524細胞 SNU484細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs819T細胞、NCIH64細胞、OV-2008細胞 SCC090細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A673細胞、MOLM13細胞、Lewis Lung細胞 MDCK supertube細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MF2059細胞、NCIH1693細胞、NBL-4細胞 H1522細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Swiss 3T3細胞、AML193細胞、CTLA4Ig-24細胞 HuT 78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 174T細胞、SKMEL3細胞、ST細胞 Z310 epithelioid cells大鼠脈絡(luò)從上皮細胞系 TMK-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGHU3細胞、SF 295細胞、BOWES細胞 BC3H-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:769P細胞、MES 13細胞、Calu3細胞 HEC251細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL1-0細胞、MUTZ-3細胞、C3H/10T1/2-clone8細胞 MRASMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tohoku Hospital Pediatrics-1細胞、BOWES細胞、JEKO細胞 "
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