細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)試劑盒

中文名稱：細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T

形態(tài)學(xué)檢測(cè)是研究細(xì)胞凋亡的最基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的，起初，細(xì)胞間連接和微絨毛消失，細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個(gè)個(gè)空泡，核糖體與線粒體等細(xì)胞器聚集，結(jié)構(gòu)尚無明顯改變，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂成碎塊，此時(shí)細(xì)胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個(gè)細(xì)胞變成數(shù)個(gè)大小不等的有膜包裹的凋亡小體：最后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細(xì)胞吞噬、消化。上述這些形態(tài)學(xué)的變化，可以通過本試劑盒中的染色及光學(xué)顯微鏡觀察。

試劑盒組分：
Dye Reagent 1×10mL
Dye Reagent 2×1mL
Buffer A×10mL

注意事項(xiàng)：利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行該項(xiàng)操作時(shí)，不要用血計(jì)板配套的質(zhì)地較硬的蓋玻片，而用普通的蓋玻片反而更利于結(jié)果的觀察。

操作方法
1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，消化收集細(xì)胞；
2. 用PBS 洗滌細(xì)胞二次，并調(diào)成濃度為1×106cells/ml 細(xì)胞懸液；
3. 吸取50~100μL 的細(xì)胞懸液均勻涂布于載玻片（A 片）上或用離心涂片機(jī)制片，室溫晾干，甲醇固定5min；
4. 在A 片上滴加數(shù)滴100μL 的Dyes Reagent 1 室溫染色1 min，用水輕輕洗去染液；
5. 在含體積分?jǐn)?shù)為1%鹽酸的80%乙醇中分化10 s，流水沖洗1 min，晾干，顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)。
6. 在另一張涂有細(xì)胞并已于無水乙醇固定2min 的載玻片（B 片）上滴加100μL 染色液2（Dyes Reagent2 ：Buffer A=1:9 的混合液），室溫染色5～20min，用水輕輕洗去染液，室溫晾干；
7. 二甲苯浸泡3 min，以去除雜質(zhì)，使載玻片透明，最后樹脂封片，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；
8. 觀察200-500 個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞所占的比例。

結(jié)果分析A 片：凋亡細(xì)胞皺縮，胞膜完整。染色質(zhì)凝聚，嗜堿性增強(qiáng)，染成深藍(lán)色，呈環(huán)狀或新月狀附在核膜周圍，或細(xì)胞核固縮碎裂成數(shù)個(gè)圓形顆粒，核膜消失。而壞死細(xì)胞體積增大，染色質(zhì)變稀疏成網(wǎng)狀，嗜堿性減低，染成淡藍(lán)色，胞核破碎，細(xì)胞膜不完整。

B 片：凋亡細(xì)胞皺縮，胞膜完整。胞漿稀少或缺乏，染成淡紅色，染色質(zhì)凝聚，染成深紫色，細(xì)胞核固縮碎裂成數(shù)個(gè)圓形顆粒。

計(jì)算細(xì)胞凋亡率和死亡率：
細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%
細(xì)胞死亡率=壞死細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%

儲(chǔ)存：RT,避光，有效期12個(gè)月。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！