"IOSE-80 epithelioid cells人正常卵巢上皮細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:卵巢;上皮細(xì)胞;SV40轉(zhuǎn)化;女性 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細(xì)胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細(xì)胞都污染一個細(xì)菌的話,這個細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 T-47D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:149 PT細(xì)胞、HT115細(xì)胞、BCaP-37細(xì)胞 COLO679細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EPC細(xì)胞、Hs-940細(xì)胞、SCH細(xì)胞 MB468細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pt-K2細(xì)胞、BT325細(xì)胞、HEK-293A細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 IOSE-80 epithelioid cells人正常卵巢上皮細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞復(fù)蘇基本方法:1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。收到T25 flask細(xì)胞時,處理方式為:在寄送過程中,為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡,T25 flask均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask外觀,并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細(xì)胞實驗室。將原封之T25 flask靜置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞回溫至37°C,并讓運(yùn)送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml培養(yǎng)基于flask內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中,或細(xì)胞已長滿盤,則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 MOLP2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA231細(xì)胞、Panc2.03細(xì)胞、PTK1細(xì)胞 MHH-CALL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIEC細(xì)胞、KYSE 270細(xì)胞、OCI/AML-3細(xì)胞 SuDHL 10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞、CATHa細(xì)胞、SK-MEL 28細(xì)胞 RM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ChaGo K-1細(xì)胞、HOP-92細(xì)胞、159PT細(xì)胞 J82 COT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-1細(xì)胞、Namalva細(xì)胞、NCIH196細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 IOSE-80 epithelioid cells人正常卵巢上皮細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 細(xì)胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。 33604細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMS-18細(xì)胞、H-711細(xì)胞、U118細(xì)胞 LA795細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero from pool #76細(xì)胞、HLF-a細(xì)胞、OVCAR-5細(xì)胞 FRhK-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IEC-18細(xì)胞、EA hy 926細(xì)胞、WEHI-164細(xì)胞 SBC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-C2A細(xì)胞、KLE細(xì)胞、RD細(xì)胞 CCC-HSF-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McArdle RH-7777細(xì)胞、UMNSAH-DF-1細(xì)胞、2780細(xì)胞 H322細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-x63-Ag8 653細(xì)胞、Jiyoye細(xì)胞、293F細(xì)胞 A-172細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK Mel 2細(xì)胞、HPAF-2細(xì)胞、KALS-1細(xì)胞 H-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1648細(xì)胞、NALM6細(xì)胞、H4IIE細(xì)胞 DC 2.4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:526細(xì)胞、HFLS-OA細(xì)胞、NBL-S細(xì)胞 Adeno 293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-824細(xì)胞、Hep-G2/C3A細(xì)胞、HCAEC細(xì)胞 IOSE-80 epithelioid cells人正常卵巢上皮細(xì)胞系 KE39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFT8810細(xì)胞、ChaGo K-1細(xì)胞、HBE 135-E6/E7細(xì)胞 HLF-a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TW01細(xì)胞、MDAMB330細(xì)胞、COLO.205細(xì)胞 HLE B-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細(xì)胞、Ly1細(xì)胞、CZ-1細(xì)胞 MonoMac1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-3細(xì)胞、95C細(xì)胞、C38細(xì)胞 Keio University-19-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF539細(xì)胞、RPMI no 8226細(xì)胞、IHH-4細(xì)胞 I90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES 13細(xì)胞、SW1463細(xì)胞、INS-1細(xì)胞 I90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES 13細(xì)胞、SW1463細(xì)胞、INS-1細(xì)胞 H2110細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COV504細(xì)胞、HEK-AD 293細(xì)胞、CCD18Co細(xì)胞 NCI-SNU-1040細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL-2細(xì)胞、NIE 115細(xì)胞、H-1417細(xì)胞 H196細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-2664細(xì)胞、HcaF細(xì)胞、GM01232細(xì)胞 GOS-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-837細(xì)胞、8305C_1細(xì)胞、OV-90細(xì)胞 U-251_MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKGT4細(xì)胞、MDA-MB-134VI細(xì)胞、A673細(xì)胞 Dakiki細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS411N細(xì)胞、DU 145細(xì)胞、U031細(xì)胞 Ku812細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VK-2/E6E7細(xì)胞、HTh 74細(xì)胞、EFM192細(xì)胞 Rat Basophilic Leukemia-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp2/O-Ag14細(xì)胞、PG-LH7細(xì)胞、CAL-27細(xì)胞 HS 683T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H522細(xì)胞、U266細(xì)胞、3T3-Swiss細(xì)胞 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tridactylus Kidney 1細(xì)胞、C-127細(xì)胞、VK2細(xì)胞 Los Angeles Prostate Cancer-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF295細(xì)胞、HKBML細(xì)胞、HRVEC細(xì)胞 Central Adrenergic TH-expressing a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC-11細(xì)胞、H-128細(xì)胞、LAPC4細(xì)胞 AML-EOL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSAS1細(xì)胞、FAK+/+細(xì)胞、NCI-H2009細(xì)胞 SKES1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madison 109細(xì)胞、Hs819.T細(xì)胞、HONE1細(xì)胞 Tj-905細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GH 3細(xì)胞、COLO678細(xì)胞、mousepodocyte細(xì)胞 143BTK-細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9細(xì)胞、NCIH1770細(xì)胞、HCEC細(xì)胞 P3X63-Ag8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:8226/S細(xì)胞、PC14細(xì)胞、OV3121細(xì)胞 CP-70細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHCC97-H細(xì)胞、SNU-5細(xì)胞、UMC-11細(xì)胞 OSKM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMEC/D3細(xì)胞、Hs 839.T細(xì)胞、CCD-841-CoTr細(xì)胞 OSKM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMEC/D3細(xì)胞、Hs 839.T細(xì)胞、CCD-841-CoTr細(xì)胞 TE353.SK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Calu-3細(xì)胞、P3/NSI/1-AG4-1細(xì)胞、BC-021細(xì)胞 NPA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rabbit Kidney 13細(xì)胞、JB-6細(xì)胞、GM16136細(xì)胞 RPMI 7666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS 53細(xì)胞、SR-786細(xì)胞、SN12C-PM6細(xì)胞 MSTO211H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NFS-60細(xì)胞、SUM-159PT細(xì)胞、CATH-a細(xì)胞 NALM-6-M1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-15細(xì)胞、KRCY細(xì)胞、LAD 2細(xì)胞 UMNSAH-DF 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EOL1細(xì)胞、SK.MEL.2細(xì)胞、H2052_MM細(xì)胞 L929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1792細(xì)胞、HuCC-T1細(xì)胞、293 EBNA細(xì)胞 HEK;293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1954 BL細(xì)胞、B16/F1細(xì)胞、PaTu 8988 S細(xì)胞 NuTu 19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGE細(xì)胞、PT-K75細(xì)胞、HB611細(xì)胞 Hs 343.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TN5B14細(xì)胞、HKC細(xì)胞、V79-1細(xì)胞 UT7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEG01細(xì)胞、TE-671細(xì)胞、T/GHA-VSMC細(xì)胞 NCI-H2066細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_08_13細(xì)胞、Hs606T細(xì)胞、3T3細(xì)胞 IOSE-80 epithelioid cells人正常卵巢上皮細(xì)胞系 SNU-449細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2347細(xì)胞、PE/CA-PJ34 (clone C12)細(xì)胞、TPC1細(xì)胞 HRC-99細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CW-2細(xì)胞、NCIH1836細(xì)胞、Saos2細(xì)胞 RCC 786-O細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IM95細(xì)胞、LP1細(xì)胞、MeSoTheliOma-211H細(xì)胞 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