"Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:表皮鱗癌 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 624mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO206細(xì)胞、K-562細(xì)胞、HUT-28細(xì)胞 SW 403細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL_S細(xì)胞、4T1-LUC細(xì)胞、A375細(xì)胞 H1355細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-3細(xì)胞、SN-12C細(xì)胞、NCI-H250細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長(zhǎng),用胰酶消化的時(shí)候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞。而且長(zhǎng)得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長(zhǎng)得滿滿的了。想請(qǐng)教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動(dòng)培養(yǎng)皿的時(shí)候盡量動(dòng)作輕,避免晃動(dòng)。細(xì)胞生長(zhǎng)挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng):二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時(shí)沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長(zhǎng)。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng),一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 NCI-H2081細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H102細(xì)胞、Mouse podocyte細(xì)胞、Evsa-T細(xì)胞 FF-WT-BJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-HPNE細(xì)胞、R 2 C細(xì)胞、H-4細(xì)胞 SU.86細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCam-2細(xì)胞、IGROV1細(xì)胞、HPAF-I細(xì)胞 SBC-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC4006細(xì)胞、NCIH716細(xì)胞、RM-1細(xì)胞 H1435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc5.04細(xì)胞、NCIH1395細(xì)胞、190PT細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購(gòu)買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購(gòu)買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購(gòu)買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 Highly Aggressively Proliferating Immortalized細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:THP 1細(xì)胞、IGR-OV1細(xì)胞、BHK-21細(xì)胞 RFL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1197細(xì)胞、CAKI.1細(xì)胞、COLO 738細(xì)胞 JG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC9細(xì)胞、High5細(xì)胞、MFE-296細(xì)胞 SKMEL24細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D clone 3細(xì)胞、UMNSAH/DF-1細(xì)胞、RGC6細(xì)胞 CCLP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細(xì)胞、CORL51細(xì)胞、A20細(xì)胞 CMT167細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1/1-Ag4.1細(xì)胞、LIM-1215細(xì)胞、MC/CAR細(xì)胞 Large Cell Lung Cancer-103H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WPMY-1細(xì)胞、A2780CP細(xì)胞、NCI-SNU-423細(xì)胞 LLC-PK(1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Murine Leydig Tumor Cell line-1細(xì)胞、mRTEC細(xì)胞、HLMVEC細(xì)胞 A375-MEL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 746.T細(xì)胞、SKLU-1細(xì)胞、Porcine Kidney-15細(xì)胞 OVCAR.4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF/CEM細(xì)胞、BeWo細(xì)胞、MDCC MSB1細(xì)胞 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細(xì)胞系 MDA-MB-134-VI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB436細(xì)胞、TGW-nu細(xì)胞、RAOEC細(xì)胞 HCC1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1588細(xì)胞、REC細(xì)胞、SNU-16細(xì)胞 J82 COT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-1細(xì)胞、Namalva細(xì)胞、NCIH196細(xì)胞 Hs 281.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-320-DM細(xì)胞、NCM460細(xì)胞、ARH-77細(xì)胞 SK-SH-SY5Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGY-7701細(xì)胞、SKO007細(xì)胞、RS4;11細(xì)胞 BE2_C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJRH30細(xì)胞、HN4細(xì)胞、AE1201細(xì)胞 BE2_C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJRH30細(xì)胞、HN4細(xì)胞、AE1201細(xì)胞 SKNMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU812-F細(xì)胞、BC-028細(xì)胞、CAL 39細(xì)胞 RA-FLSs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0044細(xì)胞、ZR75-30細(xì)胞、L6細(xì)胞 VSC4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCH-1細(xì)胞、KE-37細(xì)胞、118 MG細(xì)胞 SKES1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madison 109細(xì)胞、Hs819.T細(xì)胞、HONE1細(xì)胞 Mouse Bladder Tumor line-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87-1細(xì)胞、Porcine Kidney-15細(xì)胞、IPLB-SF-21細(xì)胞 Hs 895 T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CP-70細(xì)胞、THP-1細(xì)胞、MLTC-1細(xì)胞 P1-Raji細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC-10RGB細(xì)胞、MG-HU-3細(xì)胞、OCI-AML-5細(xì)胞 Hs746-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU 4475細(xì)胞、NCI-H2126細(xì)胞、KY-270細(xì)胞 HELF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BAR-T細(xì)胞、MBT-2細(xì)胞、CAL-120細(xì)胞 ME16C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H250細(xì)胞、Hs-611-T細(xì)胞、3T3J2細(xì)胞 PSN-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJ1細(xì)胞、NB-19細(xì)胞、293E細(xì)胞 JKT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hi-5細(xì)胞、PC3M-1E8細(xì)胞、CAL 120細(xì)胞 GalK 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Homo sapiens No. 578, breast cells細(xì)胞、HEB細(xì)胞、WiDr細(xì)胞 SKG IIIa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS578T細(xì)胞、NIH:OVCAR-3細(xì)胞、WEHI 3細(xì)胞 X63Ag8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT144mel細(xì)胞、Leydig細(xì)胞、SW-962細(xì)胞 U-251細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 606細(xì)胞、293E細(xì)胞、CT26-clone 25細(xì)胞 NCIH1563細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03570E細(xì)胞、COLO-738細(xì)胞、TOV112D細(xì)胞 LNT-229細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1435細(xì)胞、MAVER-1細(xì)胞、C-33A細(xì)胞 CAL 78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-387細(xì)胞、U138-MG細(xì)胞、MB49細(xì)胞 NCI-H146細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F10細(xì)胞、HCC1143細(xì)胞、DLD-1細(xì)胞 HME-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ACT-1細(xì)胞、GM02219C細(xì)胞、MIHA細(xì)胞 HPB/ALL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SP-2/0-AG14細(xì)胞、H-1299細(xì)胞、HGBEC細(xì)胞 HCT15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P-3J細(xì)胞、HuT 102細(xì)胞、OVCAR 8細(xì)胞 High Five細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KLN-205細(xì)胞、SW-48細(xì)胞、D-341細(xì)胞 LX-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-435S細(xì)胞、OVCA433_Bast細(xì)胞、GM04678細(xì)胞 MIA PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細(xì)胞、SP2細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞 MC-3T3-E1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC-4細(xì)胞、Mo 59J細(xì)胞、NCI-SNU-182細(xì)胞 HME1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC 116細(xì)胞、LNCaP clone FGC細(xì)胞、NCIH1666細(xì)胞 OK-WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BBE細(xì)胞、AML-193細(xì)胞、PLA-801C細(xì)胞 JROECL 21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KATOIII細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-231細(xì)胞、MeT5A細(xì)胞 M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:1E8-H細(xì)胞、H548細(xì)胞、Panc-03.27細(xì)胞 CCD1095Sk細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H711細(xì)胞、ETCC-007細(xì)胞、MM134細(xì)胞 KCL22細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC9811-P細(xì)胞、EC-GI細(xì)胞、Hs27F細(xì)胞 SK-RC 42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 13細(xì)胞、Hs 870.T細(xì)胞、USMC細(xì)胞 JHH-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03671細(xì)胞、Hs_578t細(xì)胞、HBE 135-E6E7細(xì)胞 HOS TE 85細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293AD細(xì)胞、LI7細(xì)胞、MOVAS-1細(xì)胞 H322細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-x63-Ag8 653細(xì)胞、Jiyoye細(xì)胞、293F細(xì)胞 VERO C 1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMCD3細(xì)胞、FDCP-1細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4細(xì)胞 CAL 12T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS-TE85細(xì)胞、SW-1990細(xì)胞、MES-SA/Dx-5細(xì)胞 EST50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-1095Sk細(xì)胞、GLRK 13細(xì)胞、SKES1細(xì)胞 Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRCLCD細(xì)胞、Hs940.T細(xì)胞、Verda reno細(xì)胞 Michigan Cancer Foundation-12A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-12細(xì)胞、HSC/mHSC細(xì)胞、CAL27細(xì)胞 OVCAR10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U 937細(xì)胞、LS-180細(xì)胞、SAOS 2細(xì)胞 Ishikawa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C166細(xì)胞、CCD19Lu細(xì)胞、SUM-102PT細(xì)胞 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細(xì)胞系 GM02219D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RMa-bm細(xì)胞、WSU-DLCL2細(xì)胞、HFT8810細(xì)胞 CAL-33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 678細(xì)胞、Evsa-T細(xì)胞、NCI-H1385細(xì)胞 BIC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1048細(xì)胞、AX-Mel細(xì)胞、KTC-1細(xì)胞 JF305細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT115細(xì)胞、C32 mel細(xì)胞、NCI-HUT-596細(xì)胞 "
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