"Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細胞系 細胞背景資料:表皮鱗癌 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 624mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO206細胞、K-562細胞、HUT-28細胞 SW 403細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL_S細胞、4T1-LUC細胞、A375細胞 H1355細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-3細胞、SN-12C細胞、NCI-H250細胞 細胞生長:貼壁 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談談個人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 NCI-H2081細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H102細胞、Mouse podocyte細胞、Evsa-T細胞 FF-WT-BJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-HPNE細胞、R 2 C細胞、H-4細胞 SU.86細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCam-2細胞、IGROV1細胞、HPAF-I細胞 SBC-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC4006細胞、NCIH716細胞、RM-1細胞 H1435細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc5.04細胞、NCIH1395細胞、190PT細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。 Highly Aggressively Proliferating Immortalized細胞系相關(guān)產(chǎn)品:THP 1細胞、IGR-OV1細胞、BHK-21細胞 RFL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1197細胞、CAKI.1細胞、COLO 738細胞 JG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC9細胞、High5細胞、MFE-296細胞 SKMEL24細胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D clone 3細胞、UMNSAH/DF-1細胞、RGC6細胞 CCLP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細胞、CORL51細胞、A20細胞 CMT167細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1/1-Ag4.1細胞、LIM-1215細胞、MC/CAR細胞 Large Cell Lung Cancer-103H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WPMY-1細胞、A2780CP細胞、NCI-SNU-423細胞 LLC-PK(1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Murine Leydig Tumor Cell line-1細胞、mRTEC細胞、HLMVEC細胞 A375-MEL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 746.T細胞、SKLU-1細胞、Porcine Kidney-15細胞 OVCAR.4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF/CEM細胞、BeWo細胞、MDCC MSB1細胞 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細胞系 MDA-MB-134-VI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB436細胞、TGW-nu細胞、RAOEC細胞 HCC1008細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1588細胞、REC細胞、SNU-16細胞 J82 COT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-1細胞、Namalva細胞、NCIH196細胞 Hs 281.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-320-DM細胞、NCM460細胞、ARH-77細胞 SK-SH-SY5Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGY-7701細胞、SKO007細胞、RS4;11細胞 BE2_C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJRH30細胞、HN4細胞、AE1201細胞 BE2_C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJRH30細胞、HN4細胞、AE1201細胞 SKNMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU812-F細胞、BC-028細胞、CAL 39細胞 RA-FLSs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0044細胞、ZR75-30細胞、L6細胞 VSC4.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCH-1細胞、KE-37細胞、118 MG細胞 SKES1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madison 109細胞、Hs819.T細胞、HONE1細胞 Mouse Bladder Tumor line-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87-1細胞、Porcine Kidney-15細胞、IPLB-SF-21細胞 Hs 895 T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CP-70細胞、THP-1細胞、MLTC-1細胞 P1-Raji細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC-10RGB細胞、MG-HU-3細胞、OCI-AML-5細胞 Hs746-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU 4475細胞、NCI-H2126細胞、KY-270細胞 HELF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BAR-T細胞、MBT-2細胞、CAL-120細胞 ME16C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H250細胞、Hs-611-T細胞、3T3J2細胞 PSN-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJ1細胞、NB-19細胞、293E細胞 JKT1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hi-5細胞、PC3M-1E8細胞、CAL 120細胞 GalK 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Homo sapiens No. 578, breast cells細胞、HEB細胞、WiDr細胞 SKG IIIa細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS578T細胞、NIH:OVCAR-3細胞、WEHI 3細胞 X63Ag8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT144mel細胞、Leydig細胞、SW-962細胞 U-251細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 606細胞、293E細胞、CT26-clone 25細胞 NCIH1563細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03570E細胞、COLO-738細胞、TOV112D細胞 LNT-229細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1435細胞、MAVER-1細胞、C-33A細胞 CAL 78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-387細胞、U138-MG細胞、MB49細胞 NCI-H146細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F10細胞、HCC1143細胞、DLD-1細胞 HME-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ACT-1細胞、GM02219C細胞、MIHA細胞 HPB/ALL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SP-2/0-AG14細胞、H-1299細胞、HGBEC細胞 HCT15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P-3J細胞、HuT 102細胞、OVCAR 8細胞 High Five細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KLN-205細胞、SW-48細胞、D-341細胞 LX-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-435S細胞、OVCA433_Bast細胞、GM04678細胞 MIA PaCa-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細胞、SP2細胞、DoTc2-4510細胞 MC-3T3-E1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC-4細胞、Mo 59J細胞、NCI-SNU-182細胞 HME1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC 116細胞、LNCaP clone FGC細胞、NCIH1666細胞 OK-WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BBE細胞、AML-193細胞、PLA-801C細胞 JROECL 21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KATOIII細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-231細胞、MeT5A細胞 M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞系相關(guān)產(chǎn)品:1E8-H細胞、H548細胞、Panc-03.27細胞 CCD1095Sk細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H711細胞、ETCC-007細胞、MM134細胞 KCL22細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC9811-P細胞、EC-GI細胞、Hs27F細胞 SK-RC 42細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 13細胞、Hs 870.T細胞、USMC細胞 JHH-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03671細胞、Hs_578t細胞、HBE 135-E6E7細胞 HOS TE 85細胞系相關(guān)產(chǎn)品:293AD細胞、LI7細胞、MOVAS-1細胞 H322細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-x63-Ag8 653細胞、Jiyoye細胞、293F細胞 VERO C 1008細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMCD3細胞、FDCP-1細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4細胞 CAL 12T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS-TE85細胞、SW-1990細胞、MES-SA/Dx-5細胞 EST50細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-1095Sk細胞、GLRK 13細胞、SKES1細胞 Buffalo Rat Liver-3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRCLCD細胞、Hs940.T細胞、Verda reno細胞 Michigan Cancer Foundation-12A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-12細胞、HSC/mHSC細胞、CAL27細胞 OVCAR10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U 937細胞、LS-180細胞、SAOS 2細胞 Ishikawa細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C166細胞、CCD19Lu細胞、SUM-102PT細胞 Vx2 epithelioid cells兔間變表皮鱗癌瘤細胞系 GM02219D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RMa-bm細胞、WSU-DLCL2細胞、HFT8810細胞 CAL-33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 678細胞、Evsa-T細胞、NCI-H1385細胞 BIC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1048細胞、AX-Mel細胞、KTC-1細胞 JF305細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT115細胞、C32 mel細胞、NCI-HUT-596細胞 "
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