"NOZ epithelioid cells人膽囊癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:患者有癌性腹膜炎。細(xì)胞為中等分化的管狀膽囊癌。會(huì)分泌AFP和CEA。倍增時(shí)間48小時(shí),板植率14-19%。細(xì)胞可在裸鼠中成瘤,形態(tài)與原發(fā)腫瘤相似。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 HT 1197.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBSMC細(xì)胞、RMS 13細(xì)胞、KNS-42細(xì)胞 NCI-H2073細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Gerner 7666細(xì)胞、HS-68細(xì)胞、B35細(xì)胞 UMRC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL細(xì)胞、NCI-H740細(xì)胞、CMT-93細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 NOZ epithelioid cells人膽囊癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長(zhǎng)期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡(jiǎn)要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對(duì)凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長(zhǎng)不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長(zhǎng)分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 UMRC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D/cl3細(xì)胞、Malme3M細(xì)胞、HBZY-1細(xì)胞 KYSE0030細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hOMF細(xì)胞、P31/Fujioka細(xì)胞、Human Epithelioma-2細(xì)胞 H-2107細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:rUCMSCs細(xì)胞、HDQP1細(xì)胞、H-1688細(xì)胞 MHCC97L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSADX5細(xì)胞、COLO 741細(xì)胞、CEM-C7細(xì)胞 MDBK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECC10細(xì)胞、U-hth74細(xì)胞、HBZY1細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NOZ epithelioid cells人膽囊癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。 H9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:8402細(xì)胞、TE-10細(xì)胞、HEK 293細(xì)胞 NCI-H1688細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT3細(xì)胞、P 3 HR 1細(xì)胞、CCD 1112SK細(xì)胞 SHEP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-39細(xì)胞、Panc-08.13細(xì)胞、Hs940T細(xì)胞 U-87MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D341Med細(xì)胞、B16/BL6細(xì)胞、TT細(xì)胞 DHL-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTHY-ORI3.1細(xì)胞、Panc-813細(xì)胞、H2110細(xì)胞 LAN-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H82sclc細(xì)胞、207細(xì)胞、CFPAC細(xì)胞 LS411N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-510細(xì)胞、GM2219C細(xì)胞、MC-CAR細(xì)胞 H-1648細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-3細(xì)胞、MLMEC細(xì)胞、CPA47細(xì)胞 RWPE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2073細(xì)胞、EFM192A細(xì)胞、TE3細(xì)胞 8226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-15細(xì)胞、H-1930細(xì)胞、NCI H295R細(xì)胞 NOZ epithelioid cells人膽囊癌細(xì)胞系 HTori-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM6細(xì)胞、Hs 746T細(xì)胞、MUG-Chor1細(xì)胞 BJA-B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3Ag1.2.3細(xì)胞、NE-1細(xì)胞、BC-020細(xì)胞 CCD-18Co細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TW 01細(xì)胞、NCI-157細(xì)胞、A2780 CP70細(xì)胞 Institute for Medical Research-32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-415細(xì)胞、HCC1187細(xì)胞、COLO357細(xì)胞 H2141細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Reuber H-35細(xì)胞、LP-1細(xì)胞、NCI-Hut 125細(xì)胞 HEK 293 c18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBEpiC細(xì)胞、OVCAR 420細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細(xì)胞 HEK 293 c18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBEpiC細(xì)胞、OVCAR 420細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細(xì)胞 ML-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAMA細(xì)胞、H2452細(xì)胞、NCIH508細(xì)胞 RBL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBVEC細(xì)胞、Hs 604.T細(xì)胞、GM00215細(xì)胞 MES 23.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C2A細(xì)胞、Mono Mac6細(xì)胞、P3/ag細(xì)胞 BV173細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-5細(xì)胞、RBL.2H3細(xì)胞、HS-445細(xì)胞 HDQ-P1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT.116細(xì)胞、A-673細(xì)胞、HIEC細(xì)胞 HT-1197細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:766T細(xì)胞、GA-10 (Clone 4)細(xì)胞、HCT-8/V細(xì)胞 SUD-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHOK1細(xì)胞、H4-II-E-C3細(xì)胞、CHL-IU細(xì)胞 CAL 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PTK2細(xì)胞、HO8910/PM細(xì)胞、IPLB-SF 21細(xì)胞 H-2110細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC 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