"SNB-19 epithelioid cells人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NFHIOSE-29細(xì)胞、A 2058細(xì)胞、H-2347細(xì)胞 TCC-SUP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA-2/D1細(xì)胞、COLO824細(xì)胞、SK-RC-20細(xì)胞 PL-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PA1細(xì)胞、RINm-5F細(xì)胞、B 95.8細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 SNB-19 epithelioid cells人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞的衰老:體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明:成纖維細(xì)胞:來自胎兒傳代50次后衰老死亡,來自成人傳代20次后衰老死亡(與具體年齡有關(guān);來自小鼠傳代14--28次后衰老死亡,來自烏龜傳代90--125次后衰老死亡。細(xì)胞衰老過程中會發(fā)生一系列的變化,包括:蛋白質(zhì)合成速度降低,已有蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,特異蛋白質(zhì)成份出現(xiàn);同時,細(xì)胞核,線粒體,膜系統(tǒng)、骨架系統(tǒng)等都有結(jié)構(gòu)、功能的改變。細(xì)胞衰老原因,尚無定論,出現(xiàn)過好幾種理論與假說,其中得到較廣泛認(rèn)可的是“自由基損傷假說”。細(xì)胞凋亡:細(xì)胞的死亡是個體存活的正常現(xiàn)象,常見的細(xì)胞死亡形式有3種:壞死、凋亡和細(xì)胞毒性。多細(xì)胞生物的生命活動中,因?yàn)榄h(huán)境因素的突然變化或病原物的入侵,導(dǎo)致一部分細(xì)胞死去,稱為細(xì)胞的病理死亡,或細(xì)胞壞死。壞死是細(xì)胞暴露于嚴(yán)重的物理或化學(xué)刺激時導(dǎo)致的細(xì)胞死亡;細(xì)胞毒性是由細(xì)胞或者化學(xué)物質(zhì)引起的單純的細(xì)胞殺傷事件,不依賴于其它兩種細(xì)胞死亡機(jī)理,如殺傷T細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。還有一種情況,一部分細(xì)胞的死亡是生物個體正常生命活動(代謝、生長、發(fā)育、分化)的一個必要部分;似乎帶有“犧牲局部,保全整體”的意味。這種情況下的細(xì)胞死亡,明顯地受遺傳控制,稱為細(xì)胞凋亡。凋亡(Apoptosis)則是程序性的、正常的細(xì)胞死亡,是機(jī)體清除無用的或者不想要的細(xì)胞的手段。它與細(xì)胞壞死是兩個截然不同的過程,無論從形態(tài)學(xué)、生物學(xué)還是生化的特征來說,都有明顯的區(qū)別。細(xì)胞凋亡現(xiàn)象普遍存在于生物界。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖、分化和衰老起著互補(bǔ)與平衡的作用,在多細(xì)胞動物的發(fā)育、形態(tài)建成與維持中扮演至關(guān)重要的角色。作為細(xì)胞的一種基本生命現(xiàn)象,凋亡失控的結(jié)果將是可怕的:凋亡不足時,易發(fā)生癌變、病毒性疾病和自身免疫疾病;而凋亡過量則可能產(chǎn)生獲得性免疫缺陷綜合征(HIV)、重癥肝炎與退行性神經(jīng)疾病,如老年性癡呆癥(Alzheimer""s disease)、帕金森氏癥(Parkinson""s disease)。因此研究細(xì)胞凋亡及其機(jī)理具有重要的理論和實(shí)踐意義。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 Psi-2 DAP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFT 8810細(xì)胞、SJRH 30細(xì)胞、HCC1954 BL細(xì)胞 MNNG-HOS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-LY-3細(xì)胞、GB1細(xì)胞、TMD-8細(xì)胞 NCI-H524細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL8細(xì)胞、IMR32細(xì)胞、UPCI-SCC090細(xì)胞 SUM159PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS153細(xì)胞、KMH2細(xì)胞、BJA-B-1細(xì)胞 PANC-28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHAGOK1細(xì)胞、NCI-H510A細(xì)胞、H-EMC-SS細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 SNB-19 epithelioid cells人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 3T3(A31)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN-1細(xì)胞、H-548細(xì)胞、PL-11細(xì)胞 RC-4B/C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-948細(xì)胞、BA/F3細(xì)胞、SK Mel28細(xì)胞 L929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1792細(xì)胞、HuCC-T1細(xì)胞、293 EBNA細(xì)胞 U-251MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1116細(xì)胞、EC-GI-10細(xì)胞、P 3 HR 1細(xì)胞 NCI-H1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTCTL-140細(xì)胞、SNU-620細(xì)胞、HuT78細(xì)胞 RGB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RL細(xì)胞、LTEP a2細(xì)胞、SK-MES細(xì)胞 HEC-151細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepG2-luc細(xì)胞、H358細(xì)胞、T2 (174 x CEM.T2)細(xì)胞 Mel RM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFC細(xì)胞、HEK-293-F細(xì)胞、H2135細(xì)胞 SKGIIIA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Strain L-929細(xì)胞、MDAMB415細(xì)胞、H1672細(xì)胞 Be Wo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB330細(xì)胞、LNCaP C4-2B細(xì)胞、IMR-32細(xì)胞 SNB-19 epithelioid cells人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 HCC 94細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:624mel細(xì)胞、SK-MEL 28細(xì)胞、hTERT RPE-1細(xì)胞 NCI-H-82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BMDC細(xì)胞、HOS-TE85細(xì)胞、M619細(xì)胞 JS1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:786-O RCC細(xì)胞、GM07404A細(xì)胞、CHP-126細(xì)胞 RT4-D6P2T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jiyoye(P-2003)細(xì)胞、IAR 20細(xì)胞、QSG-7701細(xì)胞 NCIH2228細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KCL-22細(xì)胞、FHL-124細(xì)胞、ZYM-SVEC01細(xì)胞 MCF-7/ADR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 62細(xì)胞、CRFK細(xì)胞、SCC9細(xì)胞 MHCC-97細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-343細(xì)胞、LL2細(xì)胞、PTK-1細(xì)胞 TSU-Pr1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1568細(xì)胞、COLO-829細(xì)胞、R.K.13細(xì)胞 MC/9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A7r5細(xì)胞、H-1355細(xì)胞、CMEC/D3細(xì)胞 ONS-76細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3D4/21細(xì)胞、SC細(xì)胞、KRC Y細(xì)胞 Sp 2/0-Ag 14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHP77細(xì)胞、MC3T3E1細(xì)胞、MX1細(xì)胞 BC-021細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Highly Aggressively Proliferating Immortalized細(xì)胞、BRL細(xì)胞、MDA-MB 453細(xì)胞 SUM102PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-920細(xì)胞、TE 354.T細(xì)胞、Chang liver細(xì)胞 GM02132C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HR-8348細(xì)胞、GLC82細(xì)胞、MC57G細(xì)胞 CD18/HPAF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-9細(xì)胞、RL95-2細(xì)胞、Chinese Hamster Lung細(xì)胞 HEK-AD 293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H184A1細(xì)胞、M059K細(xì)胞、CNLMG-B5537SKIN細(xì)胞 QG-56細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SY5Y細(xì)胞、Tu-686細(xì)胞、SB細(xì)胞 Hela-Ap-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-2/ad細(xì)胞、HSKMC細(xì)胞、MKN1細(xì)胞 WM-451Lu細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-453細(xì)胞、H-1666細(xì)胞、LN-18細(xì)胞 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