"DMS 53 epithelioid cells人小細胞肺癌細胞系 細胞背景資料:詳見相關文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇相關注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 SK-Col-1細胞系相關產(chǎn)品:H-1838細胞、NIE-115細胞、TYK-nu細胞 DHL8細胞系相關產(chǎn)品:Rat Chondrosarcoma Swarm細胞、Hu-P-T4細胞、SBC5細胞 UMRC2細胞系相關產(chǎn)品:32D/cl3細胞、Malme3M細胞、HBZY-1細胞 細胞生長:貼壁 DMS 53 epithelioid cells人小細胞肺癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代的一般方法:開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細胞(單層細胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬單位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、-20℃冰箱;操作步驟:鏡檢細胞,挑選生長狀態(tài)良好,細胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。配制細胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細胞;先用PBS洗液沖洗細胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內(nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細胞表面。至細胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4天成片。(由細胞接種濃度決定);填寫傳代記錄。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代,每周2-3次 OAW42細胞系相關產(chǎn)品:EAC細胞、M210B4細胞、MDA-MB-175-VII細胞 Farage細胞系相關產(chǎn)品:NRK clone 52E細胞、NTera2/D1細胞、H-1522細胞 Tu 177細胞系相關產(chǎn)品:KP-4細胞、NCI-SNU-1細胞、H-82細胞 H-1836細胞系相關產(chǎn)品:Colo699細胞、BJ [Human fibroblast]細胞、SK-N-AS細胞 HBdSMC細胞系相關產(chǎn)品:SUM 52細胞、IHH細胞、H526細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 DMS 53 epithelioid cells人小細胞肺癌細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:上皮樣 培養(yǎng)細胞真的不難,最關鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 NCIH209細胞系相關產(chǎn)品:LA-N-5細胞、Capan 1細胞、VE細胞 OVCAR.4細胞系相關產(chǎn)品:CCRF/CEM細胞、BeWo細胞、MDCC MSB1細胞 RPMI #1846細胞系相關產(chǎn)品:KE37細胞、HSC4細胞、HS578T細胞 H-1395細胞系相關產(chǎn)品:A549-Taxol細胞、NCI-322細胞、UO-31細胞 JROECL 19細胞系相關產(chǎn)品:BI-Mel細胞、KRC Y細胞、HBSMC細胞 NCI-UMC-11細胞系相關產(chǎn)品:WM-115細胞、H1623細胞、NK-92 MI細胞 NCIH1755細胞系相關產(chǎn)品:FET細胞、RGM-1細胞、MILE SVEN1細胞 C3H10T1/2CL8細胞系相關產(chǎn)品:SKNFI細胞、TE-15細胞、H-2073細胞 HOS-143B細胞系相關產(chǎn)品:DSL6A/C1細胞、SK_N_FI細胞、RCCJF細胞 BPH1細胞系相關產(chǎn)品:U118MG細胞、MDA-MB-435-S細胞、Lewis lung carcinoma line 1細胞 DMS 53 epithelioid cells人小細胞肺癌細胞系 NCIH460細胞系相關產(chǎn)品:Panc02-H0細胞、COLO-357細胞、NCIH292細胞 BEL 7402細胞系相關產(chǎn)品:HTR-8/SVneo細胞、SW403細胞、NT-2細胞 GM02132C細胞系相關產(chǎn)品:HR-8348細胞、GLC82細胞、MC57G細胞 LC2/Ad細胞系相關產(chǎn)品:RCM1細胞、McG-1細胞、Hep II細胞 293AD細胞系相關產(chǎn)品:AHH-1細胞、GC-1spg細胞、UCLA-SO-14細胞 PA-TU-8988S細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2286細胞、OVCA 420細胞、MDA1386細胞 PA-TU-8988S細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2286細胞、OVCA 420細胞、MDA1386細胞 4T1細胞系相關產(chǎn)品:BSC40細胞、T173細胞、SK_HEP1細胞 Hs840_T細胞系相關產(chǎn)品:LIXC002細胞、578T細胞、EoL-1 cell細胞 LA-795細胞系相關產(chǎn)品:NR 8383細胞、HTori 3細胞、DHL6細胞 Psi-2-DAP細胞系相關產(chǎn)品:EAC-E2G8細胞、IEC-6細胞、OKa-C-1細胞 Hs 683.T細胞系相關產(chǎn)品:TPC1細胞、RPTC細胞、HS5細胞 SNU-520細胞系相關產(chǎn)品:H-1648細胞、H-460細胞、TE-3A細胞 U87細胞系相關產(chǎn)品:PANC1005細胞、ECC10細胞、RCM1細胞 S.B.細胞系相關產(chǎn)品:BEL7402細胞、HEK-293-EBNA細胞、DU 145細胞 HEL 299細胞系相關產(chǎn)品:H2085細胞、MM.1S細胞、L-5178-Y細胞 SK_HEP1細胞系相關產(chǎn)品:WIL2 S細胞、Panc 03.27細胞、Hk-2細胞 BIC1細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1048細胞、TR 146細胞、AHH-1細胞 NEC-8細胞系相關產(chǎn)品:TE-10細胞、Panc2_03細胞、KTA7細胞 D283MED細胞系相關產(chǎn)品:Lu99A細胞、HEK293S細胞、DoTc2細胞 C2A細胞系相關產(chǎn)品:HaCaT細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-435細胞、Hs445細胞 231-luc細胞系相關產(chǎn)品:BTT739細胞、HCC-2185細胞、RPE1-hTERT細胞 V79-GalK1細胞系相關產(chǎn)品:GM05372E細胞、NCIH322細胞、NCIH2196細胞 LU65細胞系相關產(chǎn)品:130 T細胞、H2405細胞、SW 1573細胞 OVISE細胞系相關產(chǎn)品:HCC1954BL細胞、H2087細胞、HM細胞 HCC4006細胞系相關產(chǎn)品:KAT-5細胞、HCC-94細胞、H-1184細胞 SK Mel 24細胞系相關產(chǎn)品:Earle's L cells細胞、SNK-6細胞、Mono Mac 6細胞 Gingival carcinoma Neck Metastasis細胞系相關產(chǎn)品:NIH/3T3細胞、BV-173細胞、HEK/293細胞 MLOY4細胞系相關產(chǎn)品:PC615.3細胞、GM346細胞、GM00346細胞 H1436細胞系相關產(chǎn)品:Hep 2細胞、NRK clone 49F細胞、D6P2T細胞 E6-1細胞系相關產(chǎn)品:FRhK-4細胞、293 c18細胞、143 B細胞 253J細胞系相關產(chǎn)品:GM3569細胞、Mouse Podocyte Clone-5細胞、RT4P細胞 GM17346細胞系相關產(chǎn)品:A-375.S2細胞、Line 697細胞、NCIH2342細胞 NALM-6細胞系相關產(chǎn)品:RCCJF細胞、NIH:OVCAR3細胞、MCF.7細胞 AN-3細胞系相關產(chǎn)品:U373MG細胞、COLO 320細胞、HCM細胞 SNK6細胞系相關產(chǎn)品:BJA-B1細胞、H69C細胞、CCC-HPF-1細胞 16HBE細胞系相關產(chǎn)品:MC38細胞、RASMC細胞、SNB.19細胞 YD15細胞系相關產(chǎn)品:Hs940T細胞、Emory University-2細胞、SKNO-1細胞 Ca 9-22細胞系相關產(chǎn)品:Caco-2 BBe細胞、CHL細胞、CHP212細胞 Hs 729T細胞系相關產(chǎn)品:MDA175細胞、3T3-F442A細胞、SW1463細胞 KMH2細胞系相關產(chǎn)品:SKNBE(2)細胞、ARIP細胞、PG-4 (S+L-)細胞 LoVo細胞系相關產(chǎn)品:KYSE 270細胞、SNU878細胞、NCI-H1105細胞 R3/1細胞系相關產(chǎn)品:JS1細胞、NK-10A細胞、HSC2細胞 Y3-Ag1.2.3細胞系相關產(chǎn)品:HuH1細胞、NBL-1細胞、ETCC007細胞 A-10細胞系相關產(chǎn)品:Co-115細胞、CF-PAC1細胞、SJ-RH30細胞 ESC-410細胞系相關產(chǎn)品:HOS-143B細胞、FOXNY細胞、HANK-1細胞 Hs742T細胞系相關產(chǎn)品:Colo741細胞、CEM-C7細胞、SUM190PT細胞 NCIH1755細胞系相關產(chǎn)品:FET細胞、RGM-1細胞、MILE SVEN1細胞 KTCTL-140細胞系相關產(chǎn)品:C518細胞、COLO 684細胞、H-1954細胞 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