"MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 HPAF-II/CD18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSC細(xì)胞、GM-346細(xì)胞、SUP-B15細(xì)胞 SHEP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-39細(xì)胞、Panc-08.13細(xì)胞、Hs940T細(xì)胞 MDA-MB 453細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LoVo細(xì)胞、NCI-H727細(xì)胞、2780CP細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長(zhǎng),用胰酶消化的時(shí)候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞。而且長(zhǎng)得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長(zhǎng)得滿滿的了。想請(qǐng)教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動(dòng)培養(yǎng)皿的時(shí)候盡量動(dòng)作輕,避免晃動(dòng)。細(xì)胞生長(zhǎng)挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長(zhǎng):二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時(shí)沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長(zhǎng)。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng),一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 MTEC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1833細(xì)胞、Vero 76 clone E6細(xì)胞、HS-294細(xì)胞 MCF-12F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-741細(xì)胞、FHL 124細(xì)胞、GRSL細(xì)胞 TGBC11TKB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2085細(xì)胞、NCTC-3960細(xì)胞、OVCAR-433細(xì)胞 AG 9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos-RA1細(xì)胞、IAR20細(xì)胞、NCIH345細(xì)胞 SKMEL-31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NOMO1細(xì)胞、EST81細(xì)胞、b.End3細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁或懸浮,詳見細(xì)胞說明書部分 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。 TSCC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-756細(xì)胞、M4e細(xì)胞、HuP-T4細(xì)胞 190PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 888.T細(xì)胞、OCM1A細(xì)胞、Calu 3細(xì)胞 CF PAC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WSU-DLCL(2)細(xì)胞、NCI-H841細(xì)胞、TE12細(xì)胞 H2444細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1437細(xì)胞、NCI-H1568細(xì)胞、SW 48細(xì)胞 NCI522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-kb2細(xì)胞、Epithelioma Papulosum Cyprini細(xì)胞、OCI-LY-19細(xì)胞 C-8161細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLB-985細(xì)胞、BS-C-1細(xì)胞、SNU-423細(xì)胞 TE-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GOS-3細(xì)胞、Hs 675.T細(xì)胞、SNT-8細(xì)胞 H2342細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGE細(xì)胞、3AA細(xì)胞、MC 3T3-E1細(xì)胞 Balb/3T3-4-Cl31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PL-5細(xì)胞、Tb1.Lu細(xì)胞、CHG5細(xì)胞 Colon-26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN 382細(xì)胞、PM6細(xì)胞、COLO 357細(xì)胞 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細(xì)胞系 NG10815細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30-OHK細(xì)胞、B78細(xì)胞、IOSE-80細(xì)胞 HeLa S 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:YD-38細(xì)胞、C2BBe 1細(xì)胞、L-363細(xì)胞 MDA.MB.435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-cell with DC Morphology細(xì)胞、PCI-4.2細(xì)胞、Liver-02細(xì)胞 HGF-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PAN 02細(xì)胞、SNU-869細(xì)胞、JIMT-1細(xì)胞 SCL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BNCL-2細(xì)胞、LNCaP subline C4-2細(xì)胞、PIG3細(xì)胞 SKOV-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT 3細(xì)胞、MADB-106細(xì)胞、G-292細(xì)胞 SKOV-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT 3細(xì)胞、MADB-106細(xì)胞、G-292細(xì)胞 HN4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA4細(xì)胞、MDA361細(xì)胞、H-1618細(xì)胞 YT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LLC細(xì)胞、HCEpiC細(xì)胞、SKNMC細(xì)胞 WM266細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KE-39細(xì)胞、NTERA2-cloneD1細(xì)胞、293EBNA細(xì)胞 NCI-H2085細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6細(xì)胞、H-7721細(xì)胞、HT55細(xì)胞 SK-ES-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CD18/HPAF細(xì)胞、GCT細(xì)胞、N87細(xì)胞 A7r5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKCol1細(xì)胞、HuH6細(xì)胞、NCI-H64細(xì)胞 H1693細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-14細(xì)胞、QGY7703細(xì)胞、NE1-E6E7細(xì)胞 130T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 132細(xì)胞、HuPT4細(xì)胞、F81細(xì)胞 RetroPack PT67細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAD109細(xì)胞、CAL78細(xì)胞、T84細(xì)胞 HcerEpic細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-596細(xì)胞、Hepa1-6細(xì)胞、hUC-MSC細(xì)胞 Rat Lung-65細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-07e細(xì)胞、OCI Ly3細(xì)胞、Mv.1.Lu細(xì)胞 MESSA Dx5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PASMCS細(xì)胞、CCD19-Lu細(xì)胞、U251細(xì)胞 TNC-1B12B4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa18C細(xì)胞、G-402細(xì)胞、U373MG細(xì)胞 MIA PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細(xì)胞、SP2細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞 SKN-SH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs606細(xì)胞、GOS-3細(xì)胞、B16-F0細(xì)胞 1E8-H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 7666細(xì)胞、RBSMC細(xì)胞、LNCaP細(xì)胞 H9c2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU_145細(xì)胞、HOS(TE85)細(xì)胞、FOX-NY細(xì)胞 CEM/C1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2106細(xì)胞、DH-82細(xì)胞、NK-92.05細(xì)胞 TSCC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-756細(xì)胞、M4e細(xì)胞、HuP-T4細(xì)胞 NCI-ADR-RES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Wayne State University-Head and Neck 13細(xì)胞、RPMI1846細(xì)胞、WEHI164細(xì)胞 293c18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH23細(xì)胞、UO31細(xì)胞、BC-023細(xì)胞 Gerner 7666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 821.T細(xì)胞、RT 112細(xì)胞、HEK 293A細(xì)胞 P30/OHK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WSU-HN13細(xì)胞、LCD細(xì)胞、PAEC細(xì)胞 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