MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒
中文名稱:MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒
英文名稱:MTT cell proliferation and Cytotoxicity Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:500T|1000T
MTT 分析法以代謝還原噻唑藍(lán)3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)為基礎(chǔ)?;罴?xì)胞的線粒體中存在與NADP 相關(guān)的脫氫酶,可將黃色的MTT 還原為不溶性的藍(lán)紫色的甲月贊(Formazan),死細(xì)胞此酶消失,MTT 不被還原。用DMSO 溶解Formazan 后可用酶標(biāo)儀在550nm 波長處檢測光密度。 操作方法1.在96 孔板加入細(xì)胞100μL/孔(約1×104),置37℃ 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃,含5% CO2 空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。4.將5×MTT 用Dilution Buffer 稀釋成1× MTT。5.每孔加50μL 1× MTT,在37℃孵育4 小時,使MTT 還原為甲臜。6.吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲月贊溶解,用平板搖床搖勻。7.酶標(biāo)儀在550nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 波長,于490nm 波長處檢測亦可)。 結(jié)果分析 1. 細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD值(完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 2. 求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。凱
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