"Hs 294T epithelioid cells人黑色素瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細(xì)胞。這種方法作用溫和,對細(xì)胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì),對細(xì)胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細(xì)胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細(xì)胞的損傷比較大,但是分離成單細(xì)胞懸液的能力確實(shí)比較強(qiáng)。5、物理法。直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細(xì)胞傳代時。無法使組織上的細(xì)胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細(xì)胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點(diǎn)是:對細(xì)胞損傷小,不需要中止或洗細(xì)胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細(xì)胞。不足是細(xì)胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡操作的間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細(xì)胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺上,很快細(xì)胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細(xì)胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 HcaF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H8細(xì)胞、YD-15細(xì)胞、RT-112細(xì)胞 KBM-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BPH-1細(xì)胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1細(xì)胞、Oregon J-111細(xì)胞 NCI-H1651細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Caco-2/ATCC細(xì)胞、NCI/ADRRES細(xì)胞、ARO 81-1細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 Hs 294T epithelioid cells人黑色素瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過可視法對其進(jìn)行檢測,而且它對細(xì)胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:4傳代,2-3天換液1次。 Immortal Pig Intestinal-2I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO Lec1細(xì)胞、LM TK negative細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-27細(xì)胞 L363細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha-TC1-6細(xì)胞、H1568細(xì)胞、S180細(xì)胞 BJA-B1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Me Wo細(xì)胞、Granta 519細(xì)胞、TR146細(xì)胞 MDCC MSB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLA-144細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞、Porcine Kidney-13細(xì)胞 IBMF-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC/mHSC細(xì)胞、SW954細(xì)胞、L5178-R細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Hs 294T epithelioid cells人黑色素瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:混合星狀和多邊形 造成實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染常見情況總結(jié):細(xì)胞培養(yǎng)中最常見污染的是細(xì)菌、真菌和支原體污染。細(xì)胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細(xì)胞污染呢?我們根據(jù)常見細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析總結(jié)下?!具`規(guī)操作】1)為節(jié)省時間,有人已經(jīng)用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗(yàn);2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺不點(diǎn)酒精燈;點(diǎn)了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗(yàn);4)不帶手套,徒手操作;5)細(xì)胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術(shù)器械、離心機(jī)、冰箱等專用儀器設(shè)備以及專用的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細(xì)胞使用。培養(yǎng)細(xì)胞過程中使用的所有實(shí)驗(yàn)用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細(xì)胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標(biāo)簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細(xì)胞!一不小心“飄”進(jìn)你的細(xì)胞培養(yǎng)板里,細(xì)胞就會養(yǎng)的不好,啥時候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細(xì)胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細(xì)胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤?!緜鞔?xì)胞人多口雜,難管理】在傳代細(xì)胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗(yàn)在無菌條件下操作。出入試驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)服當(dāng)風(fēng)衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細(xì)胞污染;超凈臺做實(shí)驗(yàn)時,喜歡說話聊著做試驗(yàn),要是還不帶口罩,里面就有很多細(xì)菌等著去攻擊你的細(xì)胞呢! NCIH1792細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS TE85細(xì)胞、Y3-Ag 1.2.3細(xì)胞、HCC1833細(xì)胞 U-373 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-132細(xì)胞、Huh7.5.1細(xì)胞、GS9L細(xì)胞 BC-023細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PL5細(xì)胞、COLO320HSR細(xì)胞、Gingival carcinoma Neck Metastasis細(xì)胞 C57 Mouse Tumor 93細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos(RA1)細(xì)胞、HeLa-229細(xì)胞、Sf21細(xì)胞 NCI-H1581細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ROS1728細(xì)胞、NCI-SNU-C2A細(xì)胞、GBC-SD細(xì)胞 MDA-134細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV1細(xì)胞、OACP4C細(xì)胞、LLC細(xì)胞 H-1092細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 863.T細(xì)胞、MCF 10A細(xì)胞、H-1238細(xì)胞 SCLC21H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCM-1A細(xì)胞、Balb/c3T3細(xì)胞、MDA-MB-231 #4175細(xì)胞 TALL 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Michigan Cancer Foundation-12F細(xì)胞、SW837細(xì)胞、MPC-5細(xì)胞 BRL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293細(xì)胞、LAD 2細(xì)胞、Hs 445細(xì)胞 Hs 294T epithelioid cells人黑色素瘤細(xì)胞系 CCD-33Co細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HMC細(xì)胞、SKNEP-1細(xì)胞、SBC3細(xì)胞 U20-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF-12F細(xì)胞、OPM-2細(xì)胞、HuT-102細(xì)胞 Hs 636.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EFO-27細(xì)胞、HCC1428細(xì)胞、PAa細(xì)胞 RD細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA MB231細(xì)胞、Hs281T細(xì)胞、KYSE0410細(xì)胞 BEL 7405細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H128細(xì)胞、D-341細(xì)胞、IOSE80UBC細(xì)胞 HNE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKN-AS細(xì)胞、Panc-05.04細(xì)胞、HPAEC細(xì)胞 HNE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKN-AS細(xì)胞、Panc-05.04細(xì)胞、HPAEC細(xì)胞 ACHN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCV 29細(xì)胞、BrCL18細(xì)胞、MDA-MB-468細(xì)胞 EBNA293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-I細(xì)胞、OV-1063細(xì)胞、MiaPaCa2細(xì)胞 Walker-256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AR4-IP細(xì)胞、HCC0366細(xì)胞、HEL-92_1_7細(xì)胞 B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMMC7721細(xì)胞、NCI-HUT-460細(xì)胞、LSC-1細(xì)胞 KMB-17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE354T細(xì)胞、IOSE-80細(xì)胞、Med 283細(xì)胞 NKM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ZYM-SVEC01細(xì)胞、SCL-1細(xì)胞、Roswell Park Memorial Institute 1788細(xì)胞 TK10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY70細(xì)胞、SK HEP-1細(xì)胞、NCI-H1651細(xì)胞 University of Michigan-Renal Carcinoma-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT 1376.T細(xì)胞、OVCAR 433細(xì)胞、PANC 1005細(xì)胞 Cates 1B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP2細(xì)胞、67NR細(xì)胞、A549細(xì)胞 SCC 25細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1650細(xì)胞、hESC細(xì)胞、PAN 02細(xì)胞 EB-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 1783細(xì)胞、SK-NM-C細(xì)胞、Y3-Ag 1.2.3細(xì)胞 SL-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MB39細(xì)胞、LED-WiDr細(xì)胞、E0771細(xì)胞 IGROV細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT8細(xì)胞、NFHIOSE-80細(xì)胞、PA-1細(xì)胞 MEL-526細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tj-905細(xì)胞、HEK 293-H細(xì)胞、WILL2細(xì)胞 McARH7777細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIADR.RES細(xì)胞、MRCV細(xì)胞、MASMC細(xì)胞 UWB1289細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A 2780 CP細(xì)胞、Panc_05_04細(xì)胞、NCIH2081細(xì)胞 SW 1783細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEL7404細(xì)胞、P-388細(xì)胞、LTPA細(xì)胞 FRhK4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH508細(xì)胞、CCLP-1細(xì)胞、Tn 5B1-4細(xì)胞 CALU 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00637I細(xì)胞、NCI H226細(xì)胞、Hs 695.T細(xì)胞 NCIH1341細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L5178-R細(xì)胞、WRL68細(xì)胞、HCC-827細(xì)胞 SPCA-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-688A-T細(xì)胞、BC-020細(xì)胞、CAL62細(xì)胞 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