細胞周期與凋亡檢測試劑盒

中文名稱：細胞周期與凋亡檢測試劑盒

英文名稱：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit

產品規(guī)格：50次

細胞周期與凋亡檢測試劑盒是一種采用經典的碘化丙啶染色方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。本試劑盒每個樣品的細胞數(shù)量可以為10-100萬。
  碘化丙啶是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可以產生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂，產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
  本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進行檢測。

試劑盒組成：

注意事項：
1、本試劑盒需使用流式細胞儀進行檢測。
2、需自備PBS、95%乙醇和RNase A。
3、熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
4、PI對人體有刺激性，請注意適當防護。
5、請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟：

1、細胞樣品的準備：
a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞。
b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞。

2、細胞固定：
取4毫升冰浴預冷的95%乙醇，低速渦旋震蕩的同時加入1毫升細胞懸液，混勻后4℃固定2小時或更長時間。固定12-24小時可能效果更佳。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的乙醇，以避免吸走細胞。加入約5ml冰浴預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

3、PI染色液的配制：
參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的PI染色液：

注：配制好的PI染色液短時間內可以4℃保存，宜當日使用。

4、染色：
每管細胞樣品中加入400μl PI染色液，緩慢并充分重懸細胞沉淀，37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時內完成流式檢測，能在當日完成流式檢測。

5、流式檢測和分析：
用流式細胞儀在激發(fā)波長488 nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

儲存條件：-20℃，避光保存

特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！