一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)
中文名稱:一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)
英文名稱:One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit
產品規(guī)格:20次|50次
本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于經過固定和洗滌的細胞或組織,只要經過一步染色反應,洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細胞。本試劑盒足夠檢測20個樣品。 試劑盒組份: TdT酶——————————40μl 熒光標記液————————960μl TdT酶稀釋液(選用)————500μl 細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標記的dUTP(fluorescein-dUTP),從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。注:FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫,實際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。 本試劑盒有如下優(yōu)點。 (1)高靈敏度:背景染色極低,陽性染色明亮,可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。 (2)特異性:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。 (3)快速:僅需約1-2個小時即可完成。 (4)方便:只需一步染色反應,洗滌后即可觀察,不必使用二抗等進行多步操作。 (5)應用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。 TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產生的DNA斷裂,但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開,另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。 極少數(shù)細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,同時檢測多個凋亡指標。 注意事項: 1. 需自備用于洗滌細胞的PBS或HBSS,用于封片的抗熒光淬滅封片液(,用于固定的4%多聚甲醛或向訂購免疫染色固定液,同時需自備含0.1% Triton X-100的PBS或向訂購免疫染色洗滌液()。 2. 如果用于石蠟切片的檢測,需自備蛋白酶K,二甲苯。 儲存條件:-20℃。
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