"NCI-H2087 epithelioid cells人非小細胞肺腺癌細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 SK-N-BE(1)n細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞 FRTL 5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW264細胞、OCI/AML-5細胞、NS1-Ag 4/1細胞 CAL78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE-296細胞、Hs 737.T細胞、OEC19細胞 細胞生長:貼壁 NCI-H2087 epithelioid cells人非小細胞肺腺癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談談個人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:2-1:4傳代;每周換液2次。 HSAEC1-KT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-403細胞、Duke University 4475細胞、H-1623細胞 HCC-2185細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT RPE-1細胞、SU-DHL-8細胞、KYSE140細胞 WERI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV3121細胞、AHH1細胞、HAC-84細胞 NCI-H2009細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP 212細胞、LS 174T細胞、WEHI3細胞 OCI AML4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF細胞、H-1770細胞、T-HEECs細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 NCI-H2087 epithelioid cells人非小細胞肺腺癌細胞系 細胞生長特性:懸浮生長,有少數(shù)細胞疏松貼壁 細胞形態(tài)特性:上皮樣 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 EST50細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-1095Sk細胞、GLRK 13細胞、SKES1細胞 SK-N-BE(1)n細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞 EnCa1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:K7M2-WT細胞、CHL-11細胞、NCI-H2023細胞 SK-SH-SY5Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGY-7701細胞、SKO007細胞、RS4;11細胞 NFS-60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-600-T細胞、MeSoTheliOma-211H細胞、293 H細胞 WM 2664細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-9細胞、SK-MEL24細胞、MV411細胞 OsA-CL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE11細胞、TE6細胞、NRK 52E細胞 293GP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT.549細胞、H-23細胞、R3/1細胞 WEHI231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LICR-HN6細胞、McA-RH 7777細胞、VMRC-RCZ細胞 H920細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HG2855細胞、SPCA-1細胞、MA-c細胞 NCI-H2087 epithelioid cells人非小細胞肺腺癌細胞系 NCI-H146細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F10細胞、HCC1143細胞、DLD-1細胞 Jurkat Clone E6-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CNE2Z細胞、D-324MED細胞、RIN-m細胞 MAntle cell VERona-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CORL88細胞、PASMCS細胞、Tu686細胞 NCTC clone 929細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB157細胞、SU-DHL-1細胞、CCD19Lu細胞 OEC19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE671細胞、PE/CA-PJ34細胞、Mia PACA 2細胞 H-2198細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMS-11細胞、NCCIT細胞、JJN-3細胞 KMB17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Verda reno細胞、CNE-2Z細胞、801-D細胞 P3-X63Ag8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC 2185細胞、Reuber H35細胞、H460細胞 GS9L細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mouse INsulinoma 6細胞、RAMOS2G64C10細胞、RGE細胞 ZR-75-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-522細胞、G-Olig2細胞、DMS-114細胞 AC29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1-B細胞、H8細胞、GM3190細胞 COR-L105細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC1細胞、NCIH1435細胞、Tca-8113細胞 H82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL-5細胞、H596細胞、OCM-1細胞 W133細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HN 4細胞、UPCISCC090細胞、Sp2/0細胞 H-69細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VK2 (E6/E7)細胞、E304細胞、NCI-H1048細胞 HUV-EC-C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16/F0細胞、H1184細胞、H2444細胞 BT-549細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H719細胞、Karpas-422細胞、Dami細胞 WM115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NE1細胞、SN12PM6細胞、Jurkat FHCRC細胞 SNU16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL39細胞、FL 62891細胞、RIN14B細胞 TM4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UC-3細胞、CWR22R-V1細胞、TE-11細胞 T98細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPB-15細胞、CF PAC-1細胞、MV-4-11細胞 KYSE140細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1573細胞、BJ1細胞、H1299細胞 PLA801-95D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJSA細胞、Panc05.04細胞、MPC 11細胞 COLO-394細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H810細胞、T2 (174 x CEM.T2)細胞、NBL-12細胞 NHRF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-341 Med細胞、MB 157細胞、IOSE 29細胞 RH-35細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2452細胞、Psi2-DAP細胞、H498細胞 RGC-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16F0細胞、Human Epidermoid carcinoma #2細胞、A 72細胞 MESSADX5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MALME 3M細胞、CHL/IU細胞、P3-X63.Ag8.653細胞 OCI-Ly 10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IEC 18細胞、HLE B-3細胞、WILL-2細胞 CAL 12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PTK2細胞、HO8910/PM細胞、IPLB-SF 21細胞 KMST6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MH7A細胞、SUM102PT細胞、NB19-RIKEN細胞 NIHOVCAR3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL62891細胞、H2052細胞、MC-116細胞 ARO81細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SN12C細胞、Y3-Ag1,2,3細胞、Baby Hamster Kidney from litter No. 21細胞 JHH2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS 153細胞、KCL22細胞、675T細胞 Mono Mac 6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-841CoN細胞、Walker-Ca.256細胞、Hs 578Bst細胞 SUM-52PE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM01232E細胞、LLC-PK1細胞、U-226AR1細胞 EJ-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Functional Liver Cell-7細胞、FHCRC subclone 11細胞、Cor L88細胞 Kato-III細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos 1細胞、Mel-RM細胞、ME180細胞 HL-60 clone15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLOY4細胞、Tn-5B1-4細胞、NIH-OVCAR-3細胞 RGC6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF-295細胞、MFE 296細胞、KYSE 180細胞 L2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D562細胞、TALL-104細胞、NPC-TW 039細胞 R2C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3-Ag1,2,3細胞、SW-620細胞、HOP-92細胞 FF-WT-BJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-HPNE細胞、R 2 C細胞、H-4細胞 Huh-7.5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK 293-H細胞、NCI-H510細胞、MA104細胞 HBZY 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS-MNNG細胞、HEK-293F細胞、REC1細胞 RC-4B/C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-948細胞、BA/F3細胞、SK Mel28細胞 PC-3M 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