"DoTc2 4510 epithelioid cells人子宮頸癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞消化傳代時通常采用兩種方法:一、加入胰酶等細(xì)胞脫落后,再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,離心傳代;二、加入胰酶后,鏡下觀察待細(xì)胞始脫落時,棄胰酶,加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對細(xì)胞施加胰酶選擇,因?yàn)榭偸琴N壁不牢的細(xì)胞先脫落,對腫瘤細(xì)胞來說,這部分細(xì)胞有可能是惡性程度較高的細(xì)胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將細(xì)胞消化單細(xì)胞。對于較難消化的細(xì)胞,可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對細(xì)胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗,只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點(diǎn),直接加酶消化應(yīng)該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后,用0.04%的EDTA沖洗一次,再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min,棄取大部分EDTA,加入與剩余EDTA等量的胰酶(預(yù)熱)總體積1/10v。消化到有細(xì)胞脫落。不過有人說EDTA對細(xì)胞不好,有證據(jù)嗎?培養(yǎng)的BASMC:倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下,倒掉再加入0.125-0.25%胰酶約6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和,并分瓶這種方法簡單、省事;效果很好并且不損失細(xì)胞! PLC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs739T細(xì)胞、RPMI-1788細(xì)胞、OVCA-432細(xì)胞 RSC-96細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-52細(xì)胞、769-P細(xì)胞、SUM 52PE細(xì)胞 Line 522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4IIEC3細(xì)胞、F442-A細(xì)胞、hMSC-BM細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 DoTc2 4510 epithelioid cells人子宮頸癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因?yàn)闀枞^濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”,常會誤認(rèn)為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認(rèn)為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點(diǎn)應(yīng)不會影響細(xì)胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號的血清。 細(xì)胞傳代方法:1:2—1:3傳代,每周換液2—3次 HRC-99細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CW-2細(xì)胞、HA1800細(xì)胞、MO59J細(xì)胞 NS1-Ag4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2196細(xì)胞、OCI-Ly 3細(xì)胞、SW-626細(xì)胞 V-79細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-5細(xì)胞、H9細(xì)胞、SKM1細(xì)胞 Hs940-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2228細(xì)胞、SNU-886細(xì)胞、DMS 79細(xì)胞 WRL68細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-283細(xì)胞、H-2107細(xì)胞、LC-2/ad細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 DoTc2 4510 epithelioid cells人子宮頸癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴(yán)格遵照無菌操作):1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通??刂圃冢?2min);2)鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散;3)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);4)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存;特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))1)收到細(xì)胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時);2)貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng);3)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室。 NE1-E6E7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU668細(xì)胞、H-1105細(xì)胞、MOLT 4細(xì)胞 H-647細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit225/K6細(xì)胞、P3X63 AG 8.653細(xì)胞、NRK49F細(xì)胞 SCL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCTC clone 1469細(xì)胞、HTR-8細(xì)胞、RWPE1細(xì)胞 UMNSAH-DF1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC10細(xì)胞、BE(2)-M17細(xì)胞、CAL-12T細(xì)胞 H64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC109細(xì)胞、NCI H82細(xì)胞、PLC PRF 5細(xì)胞 LY-R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EJ1細(xì)胞、A498細(xì)胞、Colon-26細(xì)胞 TK10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY70細(xì)胞、SK HEP-1細(xì)胞、NCI-H1651細(xì)胞 HuTu-80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Alpha Mouse Liver 12細(xì)胞、3T3-L1 ad細(xì)胞、Vero from pool #76細(xì)胞 MeSoTheliOma-211H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BIU-87細(xì)胞、Instituto Biologico-Rim Suino-2細(xì)胞、SU-DHL-1細(xì)胞 SW 954細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A375-S2細(xì)胞、Mel526細(xì)胞、SUIT 2細(xì)胞 DoTc2 4510 epithelioid cells人子宮頸癌細(xì)胞系 HBSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 832(C).T細(xì)胞、SW1222細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞 NCI-H2073細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Gerner 7666細(xì)胞、HS-68細(xì)胞、B35細(xì)胞 MDCC-MSB-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-33-A細(xì)胞、RDES-1細(xì)胞、NCI-H1623細(xì)胞 U118MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2141細(xì)胞、TCCSUP細(xì)胞、SNU-878細(xì)胞 Lu-65細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LO2細(xì)胞、NCIH661細(xì)胞、MDAMB175細(xì)胞 NCIADR.RES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE 1細(xì)胞、SU-DHL-5細(xì)胞、3LL細(xì)胞 NCIADR.RES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE 1細(xì)胞、SU-DHL-5細(xì)胞、3LL細(xì)胞 Hs-578Bst細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MN 60細(xì)胞、P3-Jiyoye細(xì)胞、UMR-106細(xì)胞 CNLMG-B5537SKIN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCI:SCC90細(xì)胞、L 540細(xì)胞、SK-N-BE2細(xì)胞 SKRC-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1155細(xì)胞、SPDC-CCL141細(xì)胞、MOLT-3細(xì)胞 RA.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TT細(xì)胞、H-1092細(xì)胞、COLO 680N細(xì)胞 MHCC 97-L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT-26 WT細(xì)胞、U-2OS細(xì)胞、Colon38細(xì)胞 Hs-695-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H226細(xì)胞、JB6 Cl 30細(xì)胞、OVCA-420細(xì)胞 UPCISCC090細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA-4 [Mouse lung adenoma]細(xì)胞、2PK-3細(xì)胞、3T3F442A細(xì)胞 MODE-K細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-4B細(xì)胞、GM03190A細(xì)胞、H-69細(xì)胞 LTEP-sm細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H146細(xì)胞、293/EBNA細(xì)胞、HFL-I細(xì)胞 hTERT RPE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGY-7703細(xì)胞、CCRFCEM細(xì)胞、G519細(xì)胞 M619細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H498細(xì)胞、PC-10細(xì)胞、UM-RC-2細(xì)胞 CCK-81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H6c7細(xì)胞、MA-c細(xì)胞、Mouse Colon 38細(xì)胞 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