"CAMA-1 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細(xì)胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細(xì)胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 WERI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV3121細(xì)胞、AHH1細(xì)胞、HAC-84細(xì)胞 HuH6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel526細(xì)胞、LC1細(xì)胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞 MEC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-I細(xì)胞、HCC-2935細(xì)胞、NCI-H889細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 CAMA-1 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:3—1:4傳代;每周換液2-3次。 OCM1A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:686LN-M4e細(xì)胞、C-Lu-65細(xì)胞、HUT 226細(xì)胞 OEC33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ZR-75-1細(xì)胞、HPF細(xì)胞、Wien133細(xì)胞 H69/P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mo 59J細(xì)胞、SNU-1040細(xì)胞、HFT-8810細(xì)胞 KFB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:YAC-1細(xì)胞、KYSE0030細(xì)胞、TK-10細(xì)胞 WEHI 164細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFLS-OA細(xì)胞、H-250細(xì)胞、Neuro-2a細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 CAMA-1 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞貼壁斑塊;緊湊,很少匯合 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細(xì)胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 MDCK supertube細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MF2059細(xì)胞、NCIH1693細(xì)胞、NBL-4細(xì)胞 SW839細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-2細(xì)胞、Kit 225 K6細(xì)胞、SNU182細(xì)胞 HO-8910PM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T6細(xì)胞、TYKnu細(xì)胞、T98G細(xì)胞 SCC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1048細(xì)胞、TE7細(xì)胞、SUM-149PT細(xì)胞 3T3 clone A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC-109細(xì)胞、NB-4細(xì)胞、BDCM細(xì)胞 H-2196細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTori 3細(xì)胞、PANC3.27細(xì)胞、C1R細(xì)胞 UMUC-14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCAEC細(xì)胞、NS-20Y細(xì)胞、CTLL2細(xì)胞 C2C12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OC 316細(xì)胞、COLO-HSR細(xì)胞、RPE D407細(xì)胞 SB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU8686細(xì)胞、KG-1細(xì)胞、Tu 177細(xì)胞 G361-mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KBM-5細(xì)胞、TK-1細(xì)胞、REC 1細(xì)胞 CAMA-1 epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 FL83B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H847細(xì)胞、SW 837細(xì)胞、WM266-4細(xì)胞 NOK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞、RPMI 1846細(xì)胞、DoHH2細(xì)胞 HNEpC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat-77細(xì)胞、M-NFS-60細(xì)胞、C4-I細(xì)胞 HPAEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero細(xì)胞、FBHE細(xì)胞、SK-SH-SY5Y細(xì)胞 SK-N-BE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNT8細(xì)胞、NCI-H676B細(xì)胞、SUM159細(xì)胞 BJAB-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF767細(xì)胞、SkMel31細(xì)胞、Hs739T細(xì)胞 BJAB-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF767細(xì)胞、SkMel31細(xì)胞、Hs739T細(xì)胞 Colon26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ABE8.1/2細(xì)胞、TE 85.T細(xì)胞、BCECs細(xì)胞 NTera 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:N1E115細(xì)胞、NK62a細(xì)胞、NCI-H295細(xì)胞 MHCC 97細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LL2細(xì)胞、EL-4細(xì)胞、MDA-kb2細(xì)胞 BE2-M17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO680N細(xì)胞、CDC/EU.HMEC-1細(xì)胞、SW1222細(xì)胞 NCIH522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa16C細(xì)胞、CAL 120細(xì)胞、OVCAR433細(xì)胞 95D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCUM-1細(xì)胞、C4-2細(xì)胞、NTHY-ORI3.1細(xì)胞 NCI-H211細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H22細(xì)胞、JG細(xì)胞、P3 (Jiyoye)細(xì)胞 BIU87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2591細(xì)胞、NCI-H358細(xì)胞、HSAEC1-KT細(xì)胞 CA-46細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-95-8細(xì)胞、Daoy細(xì)胞、9L細(xì)胞 CHP212細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTV1細(xì)胞、T-98細(xì)胞、Farage Original Line細(xì)胞 Nakata-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2172細(xì)胞、JVM-2細(xì)胞、NCIADRRES細(xì)胞 SKNMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU812-F細(xì)胞、BC-028細(xì)胞、CAL 39細(xì)胞 Vero C1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 206F細(xì)胞、SU 86.86細(xì)胞、TW01細(xì)胞 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