"KLE epithelioid cells人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞源自64歲子宮內(nèi)膜癌女性患者 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時(shí),從組織消化下細(xì)胞。這種方法作用溫和,對(duì)細(xì)胞損傷較小,但是,價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì),對(duì)細(xì)胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細(xì)胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個(gè)人的使用經(jīng)常覺得對(duì)細(xì)胞的損傷比較大,但是分離成單細(xì)胞懸液的能力確實(shí)比較強(qiáng)。5、物理法。直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細(xì)胞傳代時(shí)。無法使組織上的細(xì)胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細(xì)胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點(diǎn)是:對(duì)細(xì)胞損傷小,不需要中止或洗細(xì)胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細(xì)胞。不足是細(xì)胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡操作的間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細(xì)胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺(tái)上,很快細(xì)胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細(xì)胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 SK-ML2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COR L279細(xì)胞、Sp2/0-Ag14細(xì)胞、J 111細(xì)胞 KATOIII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-841細(xì)胞、Z310細(xì)胞、NIH:OVCAR-4細(xì)胞 SHSY-5Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL-1細(xì)胞、SKLMS-1細(xì)胞、Human Corneal Epithelial cells-Transformed細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 KLE epithelioid cells人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞的衰老:體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明:成纖維細(xì)胞:來自胎兒傳代50次后衰老死亡,來自成人傳代20次后衰老死亡(與具體年齡有關(guān);來自小鼠傳代14--28次后衰老死亡,來自烏龜傳代90--125次后衰老死亡。細(xì)胞衰老過程中會(huì)發(fā)生一系列的變化,包括:蛋白質(zhì)合成速度降低,已有蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,特異蛋白質(zhì)成份出現(xiàn);同時(shí),細(xì)胞核,線粒體,膜系統(tǒng)、骨架系統(tǒng)等都有結(jié)構(gòu)、功能的改變。細(xì)胞衰老原因,尚無定論,出現(xiàn)過好幾種理論與假說,其中得到較廣泛認(rèn)可的是“自由基損傷假說”。細(xì)胞凋亡:細(xì)胞的死亡是個(gè)體存活的正常現(xiàn)象,常見的細(xì)胞死亡形式有3種:壞死、凋亡和細(xì)胞毒性。多細(xì)胞生物的生命活動(dòng)中,因?yàn)榄h(huán)境因素的突然變化或病原物的入侵,導(dǎo)致一部分細(xì)胞死去,稱為細(xì)胞的病理死亡,或細(xì)胞壞死。壞死是細(xì)胞暴露于嚴(yán)重的物理或化學(xué)刺激時(shí)導(dǎo)致的細(xì)胞死亡;細(xì)胞毒性是由細(xì)胞或者化學(xué)物質(zhì)引起的單純的細(xì)胞殺傷事件,不依賴于其它兩種細(xì)胞死亡機(jī)理,如殺傷T細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。還有一種情況,一部分細(xì)胞的死亡是生物個(gè)體正常生命活動(dòng)(代謝、生長(zhǎng)、發(fā)育、分化)的一個(gè)必要部分;似乎帶有“犧牲局部,保全整體”的意味。這種情況下的細(xì)胞死亡,明顯地受遺傳控制,稱為細(xì)胞凋亡。凋亡(Apoptosis)則是程序性的、正常的細(xì)胞死亡,是機(jī)體清除無用的或者不想要的細(xì)胞的手段。它與細(xì)胞壞死是兩個(gè)截然不同的過程,無論從形態(tài)學(xué)、生物學(xué)還是生化的特征來說,都有明顯的區(qū)別。細(xì)胞凋亡現(xiàn)象普遍存在于生物界。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖、分化和衰老起著互補(bǔ)與平衡的作用,在多細(xì)胞動(dòng)物的發(fā)育、形態(tài)建成與維持中扮演至關(guān)重要的角色。作為細(xì)胞的一種基本生命現(xiàn)象,凋亡失控的結(jié)果將是可怕的:凋亡不足時(shí),易發(fā)生癌變、病毒性疾病和自身免疫疾病;而凋亡過量則可能產(chǎn)生獲得性免疫缺陷綜合征(HIV)、重癥肝炎與退行性神經(jīng)疾病,如老年性癡呆癥(Alzheimer""s disease)、帕金森氏癥(Parkinson""s disease)。因此研究細(xì)胞凋亡及其機(jī)理具有重要的理論和實(shí)踐意義。 細(xì)胞傳代方法:1:3傳代,3-4天換液一次 Clone 15 HL-60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-578Bst細(xì)胞、CW-2細(xì)胞、KU-19-19細(xì)胞 WI 38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM-346細(xì)胞、MOLT-4細(xì)胞、Okayama University Medical School-27細(xì)胞 MSB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIPF178C細(xì)胞、HGC-27細(xì)胞、KPL1細(xì)胞 UO31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHH-CALL-2細(xì)胞、MV-4:11細(xì)胞、293 HEK細(xì)胞 P31/FUJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNUC2A細(xì)胞、NFS-60細(xì)胞、MIA-Pa-Ca-2細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 KLE epithelioid cells人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 造成實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染常見情況總結(jié):細(xì)胞培養(yǎng)中最常見污染的是細(xì)菌、真菌和支原體污染。細(xì)胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會(huì)造成細(xì)胞污染呢?我們根據(jù)常見細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析總結(jié)下?!具`規(guī)操作】1)為節(jié)省時(shí)間,有人已經(jīng)用超凈臺(tái)四個(gè)多小時(shí),不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗(yàn);2)器材或者溶液很久沒用,未檢測(cè)是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺(tái)不點(diǎn)酒精燈;點(diǎn)了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗(yàn);4)不帶手套,徒手操作;5)細(xì)胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術(shù)器械、離心機(jī)、冰箱等專用儀器設(shè)備以及專用的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細(xì)胞使用。培養(yǎng)細(xì)胞過程中使用的所有實(shí)驗(yàn)用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺(tái)和桌面,東西太多太亂:超凈臺(tái)不是儲(chǔ)物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺(tái)!這樣就會(huì)有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細(xì)胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標(biāo)簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細(xì)胞!一不小心“飄”進(jìn)你的細(xì)胞培養(yǎng)板里,細(xì)胞就會(huì)養(yǎng)的不好,啥時(shí)候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細(xì)胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個(gè)恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細(xì)胞是否污染,如果有而且好幾個(gè)板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個(gè)大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個(gè)月的就用酒精擦擦托盤?!緜鞔?xì)胞人多口雜,難管理】在傳代細(xì)胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗(yàn)在無菌條件下操作。出入試驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)服當(dāng)風(fēng)衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細(xì)胞污染;超凈臺(tái)做實(shí)驗(yàn)時(shí),喜歡說話聊著做試驗(yàn),要是還不帶口罩,里面就有很多細(xì)菌等著去攻擊你的細(xì)胞呢! GM3190細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS4-11細(xì)胞、C17.2細(xì)胞、Hep 3B2.1-7細(xì)胞 HEK293-EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 2.03細(xì)胞、Hs746T細(xì)胞、U-937細(xì)胞 Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-869細(xì)胞、SK-Col-1細(xì)胞、D341細(xì)胞 3T3J2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMRC2細(xì)胞、CAL-39細(xì)胞、HEK-293-FT細(xì)胞 CCD18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-98G細(xì)胞、IM9細(xì)胞、NCI-H2110細(xì)胞 MDCC-MSB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GA10細(xì)胞、CHO Lec1細(xì)胞、KE-37細(xì)胞 NS20-Y細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:F442-A細(xì)胞、HeLa229細(xì)胞、FM-88細(xì)胞 Fortner's melanotic melanoma #3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4I細(xì)胞、AR4-IP細(xì)胞、NCI-H2347細(xì)胞 W256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUC細(xì)胞、SNU-739細(xì)胞、SKMES1細(xì)胞 H-740細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UACC 812細(xì)胞、H-1436細(xì)胞、HNE-2細(xì)胞 KLE epithelioid cells人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 IEC-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AdHek細(xì)胞、OCI-LY-7細(xì)胞、Hs 839.T細(xì)胞 H-2141細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:67NR細(xì)胞、TK10細(xì)胞、bEND.3細(xì)胞 MCF.7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNEP1細(xì)胞、HCEC細(xì)胞、AGS細(xì)胞 MDA-MB-231-GFP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EJ細(xì)胞、LuCL4細(xì)胞、BTI-Tn-5B1-4細(xì)胞 UACC 812細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RL-952細(xì)胞、VMM5細(xì)胞、Tu212細(xì)胞 Hmy.2 CIR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Balb/c3T3細(xì)胞、NE1細(xì)胞、KYSE 450細(xì)胞 SCC25細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-940細(xì)胞、Intestinal Epithelioid Cell line No. 6細(xì)胞、P3-Jiyoye細(xì)胞 Duke University 145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M619細(xì)胞、D-283 Med細(xì)胞、Japanese Tissue Culture-39細(xì)胞 WM-2664細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mahlavu細(xì)胞、SNUC2B細(xì)胞、MDCK supertube細(xì)胞 BT 549細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU4475細(xì)胞、HS-729細(xì)胞、Mouse podocyte細(xì)胞 HCE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-1-A細(xì)胞、SMA560細(xì)胞、LUDLU-1細(xì)胞 KY-270細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B78細(xì)胞、H1688細(xì)胞、COV362細(xì)胞 APRE-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuTu-80細(xì)胞、RAW2647細(xì)胞、OCI-LY-1細(xì)胞 16HBE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC38細(xì)胞、RASMC細(xì)胞、SNB.19細(xì)胞 BNL 1MEA.7R.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO K1細(xì)胞、SF17細(xì)胞、NCTC 1469細(xì)胞 MCF 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