"TC7 Cell:人結(jié)腸癌細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:結(jié)腸癌;女性 BIU-87/Adr細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA 432細胞、PF-382細胞、KYSE50細胞 HL60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MT-3 [Human leukocytes]細胞、Farage細胞、MDA MB 436細胞 NB-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-HUT-125細胞、HCC-1438細胞、HT clone H9細胞 U-118MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK-15細胞、293EBNA細胞、HPDEC細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 TC7 Cell:人結(jié)腸癌細胞系 細胞消化過程總結(jié):其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備100%的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學那樣吹打1h,等待單細胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應(yīng)該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 H1618細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-12細胞、TCMK-1細胞、H810細胞 HECV細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD 19Lu細胞、NCTC 3960細胞、PANC-28細胞 Hs-27細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNBE2細胞、NTERA2-D1細胞、SNU5細胞 SUNE1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM06141B細胞、NCIH1930細胞、NCIH446細胞 MLO-Y4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HELF細胞、Hs 832(C).T細胞、Jiyoye (P-2003)細胞 細胞生長特性:貼壁 TC7 Cell:人結(jié)腸癌細胞系 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 SNU-354細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK RC 20細胞、Ketr-3細胞、NCTC-1469細胞 WM-266-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-966SK細胞、T-HSC細胞、MCF-7/ADR-RES細胞 JCA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-Hut 125細胞、Sp2/O細胞、H-64細胞 LS-513細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1792細胞、OCIAML4細胞、brain-derived Endothelial cells.3細胞 HCC-1428細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BNL-CL.2細胞、HFL1細胞、130-T細胞 NIH:OVCAR-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Super Tube細胞、HDLM-2細胞、IMR32細胞 WRL68細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-283細胞、H-2107細胞、LC-2/ad細胞 TC7 Cell:人結(jié)腸癌細胞系 H125細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLM16細胞、LLC-WRC 256細胞、RPPVEC細胞 BEL 7404細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo205細胞、JiyoyeP-2003細胞、HIMEC細胞 LS 180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細胞、MODE-K細胞、H-661細胞 OP9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU354細胞、P3X63 Ag8細胞、HCC-1187細胞 A498細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-196細胞、C2-C12細胞、OSC19細胞 SNU-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA436細胞、U-138MG細胞、U373-MG細胞 NCI-SNU-216細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPL4細胞、ANA-1細胞、H4-II-EC3細胞 BEL-7405細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1793細胞、OSKM-1細胞、Kit225/K6細胞 GM12878細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM-12細胞、COR-L26細胞、HDLM2細胞 GM12878細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM-12細胞、COR-L26細胞、HDLM2細胞 CAL-78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1435細胞、COLO 680N細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細胞 SHI-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T24(ECV304)細胞、C32r細胞、A 172細胞 D-324 Med細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-182細胞、HCT-116細胞、H2066細胞 H1417細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jiyoye細胞、GM03671C細胞、GM2131細胞 SR786細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NOR-10細胞、NCIH1944細胞、639-V細胞 143TK-細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE(2)C細胞、SK Hep1細胞、WRL-68細胞 PNT1-a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL4細胞、GC-1細胞、MSTO-211細胞 Eca 109細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO8910/PM細胞、PC 12細胞、SNU869細胞 CZ-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST細胞、EFO-27細胞、HMC細胞 FHL124細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GCT0404細胞、MADISON LUNG TA-109細胞、HeLa-229細胞 B16-BL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C6661細胞、COLO 357細胞、HLEC-B3細胞 Clone 929細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mv1Lu細胞、HET1A細胞、N1E-115細胞 174xCEM.T2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H446細胞、GA10細胞、H-460細胞 H378細胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH 8994細胞、H-929細胞、293H細胞 PC-3M 2B4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE510細胞、Reuber-H-35 hepatoma細胞、Transformed Human Liver Epithelial-2細胞 Madison lung細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-279細胞、CFPAC-1細胞、K 562細胞 VM-CUB-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHIN-3細胞、HFL 1細胞、HOS(TE85)細胞 HBE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-446細胞、RL細胞、mIMCD3細胞 TCCSUP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DiFi細胞、FOX-NY細胞、KYSE-70細胞 A549 ATCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECC1細胞、NCI-H2023細胞、NCIH2122細胞 BJAB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 320 DM細胞、SK-N-BE(2)-M17細胞、tdott細胞 Molm 13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA2-cloneD1細胞、PNT1/A細胞、SK-NSH細胞 Hi5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JC細胞、SKCO1細胞、CEMx721.174.T2細胞 KG1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2M17細胞、U-87MG ATCC細胞、Hs 766T細胞 PaTu 8988 S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 02細胞、PLC細胞、NCTC clone 929細胞 J 111細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2030細胞、MRMT-1細胞、L929細胞 CFSC-2G細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2405細胞、CCD-18Co細胞、NK 10a細胞 SJSA-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PECAPJ34細胞、HAC-84細胞、MDA.MB.435細胞 NCI H929細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 159細胞、J82COT細胞、CCRF-CEM細胞 Ramos 2G6 4C10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC-04-03細胞、TE-85細胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細胞 MDA-MB 231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT 116細胞、UM-UC-1細胞、HCC1806細胞 HEL-299細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EoL-1細胞、TE3A細胞、NCIH810細胞 Uhth-74細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS (TE85, Clone F5)細胞、P30-OHK細胞、OSKM-1細胞 TC7 Cell:人結(jié)腸癌細胞系 HCV29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GS9L細胞、HCC-1171細胞、WEHI 164細胞 HMEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE(2)-M17細胞、SKGT4細胞、QGP 1細胞 HEL-92_1_7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKG-IIIa細胞、H4-IIE-C3細胞、NCI H226細胞 NCTC clone 929細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB157細胞、SU-DHL-1細胞、CCD19Lu細胞 NCI-H1792細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MA 104細胞、COLO 678細胞、A-375SM細胞 H9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:8402細胞、TE-10細胞、HEK 293細胞 SCLC-21H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SPCA-1細胞、NCIH2107細胞、231-luc細胞 Caki-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 1細胞、B16-F10-BL6細胞、MPVECs細胞 REC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H-82細胞、MDA-MB 361細胞、SY5Y細胞 RN-c細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BSC-1細胞、X63細胞、NTERA-2細胞 AU-565細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LCLC-103H細胞、Clone 166細胞、Panc04.03細胞 MDA-MB 453細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LoVo細胞、S-16細胞、IHH-4細胞 "
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