"ReNcell CX Cell:人神經(jīng)干細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:神經(jīng)干細胞 LAN6細胞系相關產(chǎn)品:TE-8細胞、AD-293細胞、U373細胞 LNCaP-FGC細胞系相關產(chǎn)品:CORL26細胞、NCI-H250細胞、RA 1細胞 KU1919細胞系相關產(chǎn)品:MC9細胞、NMC-G1細胞、Panc 04.03細胞 BHT-101細胞系相關產(chǎn)品:MSTO211H細胞、DV-90細胞、JeKo 1細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 ReNcell CX Cell:人神經(jīng)干細胞系 細胞培養(yǎng)過程中相關問題總結:懸浮性細胞應如何繼代處理?一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞,其離心速率一般為300xg(約1,000rpm),5-10分鐘,過高之轉速,將造成細胞死亡;細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因;細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成;DMSO之等級和無菌過濾之方式為何?冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grade之DMSO,其本身即為無菌狀況,次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于4°C,避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質,并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜;冷凍保存細胞之方法?冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C 30~60分鐘→ (-20°C 30分鐘)→-80°C 16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20°C不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;細胞欲冷凍保存時,細胞冷凍管內(nèi)應有多少細胞濃度?冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為1x10(6)cells/ml vial,融合瘤細胞則以5x10(6)cells/ml vial為宜;應如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法;如果細胞發(fā)生微生物污染時,應如何處理?直接滅菌后丟棄之。 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 造成實驗室細胞污染常見情況總結:細胞培養(yǎng)中最常見污染的是細菌、真菌和支原體污染。細胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細胞污染呢?我們根據(jù)常見細胞培養(yǎng)實驗分析總結下?!具`規(guī)操作】1)為節(jié)省時間,有人已經(jīng)用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗;2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺不點酒精燈;點了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗;4)不帶手套,徒手操作;5)細胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術器械、離心機、冰箱等專用儀器設備以及專用的實驗服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細胞使用。培養(yǎng)細胞過程中使用的所有實驗用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細胞!一不小心“飄”進你的細胞培養(yǎng)板里,細胞就會養(yǎng)的不好,啥時候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤?!緜鞔毎硕嗫陔s,難管理】在傳代細胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗在無菌條件下操作。出入試驗室,實驗服當風衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細胞污染;超凈臺做實驗時,喜歡說話聊著做試驗,要是還不帶口罩,里面就有很多細菌等著去攻擊你的細胞呢! 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 HBMEC細胞系相關產(chǎn)品:LNCaP clone FGC細胞、U-266 AR1細胞、LS-174T細胞 PC-12細胞系相關產(chǎn)品:SW-13細胞、P3X63NS1細胞、KM933細胞 THC-8307細胞系相關產(chǎn)品:LS 123細胞、SW-403細胞、Medical Research Council cell strain-9細胞 U20-S細胞系相關產(chǎn)品:MCF-12F細胞、OPM-2細胞、HuT-102細胞 UCLA RO-81-A-1細胞系相關產(chǎn)品:293 EBNA細胞、Molm 13細胞、SUDHL8細胞 細胞生長特性:貼壁 ReNcell CX Cell:人神經(jīng)干細胞系 貼壁細胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細胞。這種方法作用溫和,對細胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質,對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細胞的損傷比較大,但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。5、物理法。直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點是:對細胞損傷小,不需要中止或洗細胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導致大量細胞死亡操作的間充質干細胞、DC細胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺上,很快細胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 SW.620細胞系相關產(chǎn)品:GM-215細胞、MCCAR細胞、SK-NMC細胞 IEC 18細胞系相關產(chǎn)品:H865細胞、alpha-TC1-6細胞、CL-40細胞 SHSY5Y細胞系相關產(chǎn)品:H1666細胞、MEF細胞、FL-83B細胞 NIE-115細胞系相關產(chǎn)品:MRASMC細胞、Hs852細胞、L5178Y細胞 OCI-AML-2細胞系相關產(chǎn)品:PSN1細胞、DMS79細胞、KLE細胞 NCIH2405細胞系相關產(chǎn)品:H-865細胞、SHG 44細胞、143TK-細胞 L5178Y TK+/- (clone 3.7.2C)細胞系相關產(chǎn)品:ECC-12細胞、HCC2108細胞、CHP 100細胞 ReNcell CX Cell:人神經(jīng)干細胞系 Mc Ardle 7777細胞系相關產(chǎn)品:PLC-PRF-5細胞、MBMEC細胞、SUDHL-6細胞 GM05887A細胞系相關產(chǎn)品:MDCK Type II細胞、H2196細胞、CORL51細胞 NCIH1437細胞系相關產(chǎn)品:H1385細胞、Madison lung細胞、PL11細胞 8226/S細胞系相關產(chǎn)品:LCD細胞、HCC-4006細胞、293細胞 MDAMB134細胞系相關產(chǎn)品:HIT.T15細胞、Panc-10.05細胞、Nittby-Salford 1細胞 H711細胞系相關產(chǎn)品:IMCD-3細胞、SW 982細胞、MGHU3細胞 Human Epithelioma-2細胞系相關產(chǎn)品:HCC-1171細胞、SNK6細胞、TEV-1細胞 RKO-AS-45-1細胞系相關產(chǎn)品:SGC996細胞、SuDHL 5細胞、Vero 76 clone E6細胞 MPC-5細胞系相關產(chǎn)品:NCI-SNU-886細胞、NCIH1703細胞、MOLM-14細胞 P30-OHKUBO細胞系相關產(chǎn)品:BALB/3T3 (clone A31)細胞、SW13細胞、Renal Carcinoma細胞 MC3T3-L1細胞系相關產(chǎn)品:C-Li-7細胞、BV2細胞、MES-SA-Dx5細胞 LO2細胞系相關產(chǎn)品:IOSE 29細胞、NR 8383細胞、Hs 695T細胞 Epstein-Barr-1細胞系相關產(chǎn)品:HIT T-15細胞、HCC1359細胞、MDCC-MSB-1細胞 SKMEL28細胞系相關產(chǎn)品:Panc 05.04細胞、Pt K1細胞、PC3M-1E8細胞 Sf-21細胞系相關產(chǎn)品:KAT5細胞、MiaPaca.2細胞、PC10細胞 Pa017C細胞系相關產(chǎn)品:PLA802細胞、CWR22Rv1細胞、Li-7細胞 PaTu 8988s細胞系相關產(chǎn)品:22Rv1細胞、HK2細胞、NCTC 929細胞 A-704細胞系相關產(chǎn)品:CEM C7細胞、HCV29細胞、NCI-H676B細胞 SU4細胞系相關產(chǎn)品:NW38細胞、MCA-38細胞、CAL-39細胞 SUM-149PT細胞系相關產(chǎn)品:AU 565細胞、LIM 1215細胞、HEYA8細胞 MPC-11細胞系相關產(chǎn)品:U2OS細胞、SJSA細胞、HIT.T15細胞 MC-38細胞系相關產(chǎn)品:OE-21細胞、SUDHL8細胞、HeLa S3細胞 Sup T-1細胞系相關產(chǎn)品:NTERA-2 cl.D1細胞、MC116細胞、SK-MEL-MeWo細胞 B16/F1細胞系相關產(chǎn)品:H345細胞、HEK293E細胞、NCIH1648細胞 HEK293-EBNA細胞系相關產(chǎn)品:Panc 2.03細胞、Hs746T細胞、U-937細胞 SW 900細胞系相關產(chǎn)品:H295R-S1細胞、H1563細胞、Tb1.Lu細胞 HCC2157細胞系相關產(chǎn)品:IMR-32細胞、Panc10.05細胞、OV433細胞 SW 403細胞系相關產(chǎn)品:NBL_S細胞、4T1-LUC細胞、A375細胞 Onda 11細胞系相關產(chǎn)品:SK-N-BE(2)C細胞、GM02219D細胞、COLO206細胞 LM-TK-細胞系相關產(chǎn)品:RPTC細胞、ID8細胞、GC-2spd(ts)細胞 Rin-M-5F細胞系相關產(chǎn)品:HuP-T3細胞、HCC-1806細胞、EOC-20細胞 EA. hy 926細胞系相關產(chǎn)品:SUM190PT細胞、THLE-2細胞、AU 565細胞 NCI-H510細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1755細胞、BE(2)M17細胞、BI-Mel細胞 NCI-H660細胞系相關產(chǎn)品:SK-MEL5細胞、GM03573細胞、LS 1034細胞 SK-N-BE(1)n細胞系相關產(chǎn)品:NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞 MDA-MB-330細胞系相關產(chǎn)品:U-226AR1細胞、SNU-216細胞、HLE B-3細胞 COLO829細胞系相關產(chǎn)品:HS-695T細胞、L-02細胞、H341細胞 EB2細胞系相關產(chǎn)品:CX1細胞、786O細胞、NCIH524細胞 MDA-MB-435細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H28細胞、3T3 L1細胞、HEK 293FT細胞 NCI-SNU-C1細胞系相關產(chǎn)品:SH-SY5Y細胞、HeLa S3細胞、PC-9/GR細胞 BNL.CL2細胞系相關產(chǎn)品:TFK-1細胞、MA-104細胞、NCIH244細胞 CCD33Co細胞系相關產(chǎn)品:T-47D細胞、U118-MG細胞、Leukemia L1210細胞 32D.cl3細胞系相關產(chǎn)品:Mouse Podocyte Clone-5細胞、LS-411N細胞、QBC939細胞 ReNcell CX Cell:人神經(jīng)干細胞系 GM2132細胞系相關產(chǎn)品:CCD 841 CoTr細胞、H2347細胞、WEHI-3細胞 WM266mel細胞系相關產(chǎn)品:Hepatoma-22細胞、HEK-293細胞、CEMC1細胞 XWLC-05細胞系相關產(chǎn)品:H1770細胞、V79-1細胞、Hela-mock細胞 HCT/FU細胞系相關產(chǎn)品:Hs 27細胞、Panc-1-P細胞、HUVSMC細胞 SK-OV-3細胞系相關產(chǎn)品:WM-239-A細胞、TCMK1細胞、NCIH2405細胞 MN 60細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H719細胞、639-V細胞、MZCRC1細胞 HPaSteC(HPSC)細胞系相關產(chǎn)品:C3H-10T1/2細胞、MyLa 2059細胞、HEL-92細胞 H2141細胞系相關產(chǎn)品:Reuber H-35細胞、LP-1細胞、NCI-Hut 125細胞 Mv 1 Lu (NBL-7)細胞系相關產(chǎn)品:BCaP 37細胞、H-1944細胞、NCI-UMC-11細胞 L 540細胞系相關產(chǎn)品:JKT1細胞、RWPE-2細胞、UACC 893細胞 LL/2(LLc1)細胞系相關產(chǎn)品:CHL/IU細胞、MDA-MB-361細胞、SW 1463細胞 Toledo細胞系相關產(chǎn)品:G-361細胞、Hs739T細胞、KP-N-RT-BM細胞 "
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