"A-875 Cell:人黑色素瘤細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:NGF受體陽性。 L5178Y TK+/-3.7.2c細胞系相關產品:293S細胞、A375mel細胞、H4IIEC3細胞 SW1417細胞系相關產品:B-16細胞、Kuramochi細胞、L細胞 SNGM細胞系相關產品:H2009細胞、RT4-D6-P2T細胞、293-FT細胞 H-510A細胞系相關產品:HUT28細胞、Line 207細胞、McCoy細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 A-875 Cell:人黑色素瘤細胞系 如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內,培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關于培養(yǎng)瓶內加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現生長速度快的細胞在玻璃瓶內生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內的生長狀態(tài)也比內好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。 細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:3傳代;3-4天1次。 造成實驗室細胞污染常見情況總結:細胞培養(yǎng)中最常見污染的是細菌、真菌和支原體污染。細胞一旦污染,大多數較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細胞污染呢?我們根據常見細胞培養(yǎng)實驗分析總結下。【違規(guī)操作】1)為節(jié)省時間,有人已經用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗;2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺不點酒精燈;點了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗;4)不帶手套,徒手操作;5)細胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術器械、離心機、冰箱等專用儀器設備以及專用的實驗服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細胞使用。培養(yǎng)細胞過程中使用的所有實驗用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細胞!一不小心“飄”進你的細胞培養(yǎng)板里,細胞就會養(yǎng)的不好,啥時候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤。【傳代細胞人多口雜,難管理】在傳代細胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗在無菌條件下操作。出入試驗室,實驗服當風衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細胞污染;超凈臺做實驗時,喜歡說話聊著做試驗,要是還不帶口罩,里面就有很多細菌等著去攻擊你的細胞呢! 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系 KASUMI6細胞系相關產品:NCIH1435細胞、OCI/AML-3細胞、RMG1細胞 16HBE14o-細胞系相關產品:Panc 3.27細胞、SGC7901細胞、HeLa/S3細胞 Chinese Hamster Ovary細胞系相關產品:Hs934T細胞、SKBR-3細胞、MGC-803細胞 NCI-H1568細胞系相關產品:MC26細胞、H2030細胞、D-283 Med細胞 293H細胞系相關產品:SMC-1細胞、HEK (AD293)細胞、MSB-1細胞 細胞生長特性:貼壁生長 A-875 Cell:人黑色素瘤細胞系 貼壁細胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細胞。這種方法作用溫和,對細胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質,對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應調節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個人的使用經常覺得對細胞的損傷比較大,但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。5、物理法。直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點是:對細胞損傷小,不需要中止或洗細胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導致大量細胞死亡操作的間充質干細胞、DC細胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺上,很快細胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 細胞形態(tài)特性:多角形 COR-L51細胞系相關產品:C26細胞、MC/9細胞、LM8細胞 LK 2細胞系相關產品:MZ-CRC-1細胞、LADMAC細胞、J774 A1細胞 Capan-2細胞系相關產品:H-1341細胞、NOR 10細胞、NG10815細胞 BHP 10-3細胞系相關產品:W133細胞、Jurkat clone A3細胞、RPMI 1788細胞 PANC 203細胞系相關產品:TE4細胞、WEHI-3細胞、L-WRN細胞 MDA-MB-468-RED細胞系相關產品:GM346細胞、Medical Research Council cell strain-5細胞、Me Wo細胞 IEC-6細胞系相關產品:AdHek細胞、OCI-LY-7細胞、Hs 839.T細胞 A-875 Cell:人黑色素瘤細胞系 P3/NS1/Ag4-1細胞系相關產品:2008細胞、AA-Mel細胞、SMMC-7721細胞 GOS3細胞系相關產品:NCIH660細胞、H-28細胞、LAN-1細胞 HCC0038細胞系相關產品:U-373MG細胞、Hs688(A)T細胞、J-774細胞 CW-2細胞系相關產品:NCIH2066細胞、C-4 I細胞、Rat Chondrosarcoma Swarm細胞 CORL105細胞系相關產品:HT-29細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細胞、MDA-MB 361細胞 CAL62細胞系相關產品:H-2405細胞、NCI-H-82細胞、AgC11x3A細胞 H184A1細胞系相關產品:28SC細胞、Baby Hamster Kidney 21細胞、Hs888 Lu細胞 TF-1a細胞系相關產品:Karpas299細胞、KYSE-140細胞、S37細胞 MKN 7細胞系相關產品:MCAEC細胞、COR-L279細胞、JEG-3細胞 MKN 7細胞系相關產品:MCAEC細胞、COR-L279細胞、JEG-3細胞 Normal Rat, August 3, 1983細胞系相關產品:HL-60 clone15細胞、Rat 1細胞、HOK細胞 GAK細胞系相關產品:RSC-364細胞、C-28I2細胞、SVEC4-10細胞 Bowes melanoma cells細胞系相關產品:HCC-1187細胞、Panc327細胞、QGY-7701細胞 AR41P細胞系相關產品:SW527細胞、P3/X63/Ag8.653細胞、EC-GI-10細胞 Panc_05_04細胞系相關產品:JIMT1細胞、H2172細胞、McARH7777細胞 RPMI8226細胞系相關產品:TERT-RPE1細胞、PLA801-95C細胞、LIPF178C細胞 CTX TNA2細胞系相關產品:JB-6 Cl 30細胞、USMC細胞、C-32細胞 MEL細胞系相關產品:RS411細胞、QGP1細胞、TE 85 ClF-5細胞 NIH:OVCAR4細胞系相關產品:Ly8細胞、CHL-1細胞、DK-MG細胞 COLO-HSR細胞系相關產品:H.Ep. #2細胞、HOC1細胞、rRTEC細胞 KU-812細胞系相關產品:PC14細胞、2008細胞、NKT細胞 SGC-7901/DDP細胞系相關產品:CCD-841CoTr細胞、DHL5細胞、LLCPK1細胞 H-1048細胞系相關產品:3T3-442A細胞、C 6細胞、OC316細胞 HUV-EC-C細胞系相關產品:B16/F0細胞、H1184細胞、H2444細胞 MG-63細胞系相關產品:TEV-1細胞、NRK-52E細胞、FK81細胞 WISH細胞系相關產品:OLN 93細胞、OVCA433細胞、SW-1116細胞 BIC-1細胞系相關產品:BALB/c 3T3 clone A31細胞、SW-756細胞、ONS76細胞 JM1細胞系相關產品:MG-HU-3細胞、MOLT 4細胞、S3-HeLa細胞 ARO81-1細胞系相關產品:IBRS2細胞、Bowes melanoma cells細胞、CoCL2細胞 HARAB細胞系相關產品:EA. hy 926細胞、Jurkat FHCRC細胞、FUOV1細胞 PLC8024細胞系相關產品:LS-174T細胞、KYSE30細胞、Panc3_27細胞 KYSE-510細胞系相關產品:OVCAR432細胞、KE37細胞、B78細胞 H-2110細胞系相關產品:RCC 786-O細胞、Hs-729-T細胞、WC00079細胞 P30-OHK細胞系相關產品:MDA468細胞、KU812-F細胞、H441細胞 LADMAC細胞系相關產品:TO175T細胞、MRC 5細胞、FHCRC subclone 11細胞 WM-451Lu細胞系相關產品:MD Anderson-Metastatic Breast-453細胞、H-1666細胞、LN-18細胞 PC2細胞系相關產品:Nb2細胞、HOP92細胞、HLEB3細胞 Tb 1 Lu (NBL-12)細胞系相關產品:VMM-5A細胞、SU-DHL-2細胞、RASMCs細胞 LSC-1細胞系相關產品:NCIH1703細胞、NIH 3T3細胞、CF-1 MEF細胞 GA-10-Clone-4細胞系相關產品:MGH-U3細胞、NCIH2135細胞、SKLMS-1細胞 HMy2.CIR細胞系相關產品:P3X63 Ag8.653細胞、OCI/AML3細胞、MC-38細胞 Granta519細胞系相關產品:TE15細胞、Balb/c 3T3細胞、Ishikawa細胞 H-35細胞系相關產品:KP 4細胞、SUDHL2細胞、BSC1細胞 A-875 Cell:人黑色素瘤細胞系 HPaSteC(HPSC)細胞系相關產品:C3H-10T1/2細胞、MyLa 2059細胞、HEL-92細胞 IMR90細胞系相關產品:Natural Killer-92細胞、Line 522細胞、COLO684細胞 PCI:SG231細胞系相關產品:NCTC-1469細胞、NCI747細胞、A10細胞 H-774細胞系相關產品:GM00637細胞、SKNBE細胞、GB-1細胞 ROS17/2.8細胞系相關產品:WERI細胞、HOS TE 85細胞、SKNAS細胞 SK Mel28細胞系相關產品:USMC細胞、KU 812F細胞、RWPE-2細胞 201T細胞系相關產品:Fetal Bovine Heart Endothelial細胞、KALS-1細胞、MDBK (NBL-1)細胞 Nb-2細胞系相關產品:C666-1細胞、SK MEL 5細胞、CL40細胞 DU145細胞系相關產品:RKN細胞、Mc Coy細胞、1.1B4細胞 MODE-K細胞系相關產品:RC-4B細胞、GM03190A細胞、H-69細胞 CACO2細胞系相關產品:PCI:SG231細胞、HFB細胞、GBCSD細胞 COLO 320HSR細胞系相關產品:A 72細胞、Human Epidermoid carcinoma #2細胞、KOSC2細胞 "
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