人補(bǔ)體成分5a酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱
Human Complement Component C5a ELISA KIT
中文名稱
人補(bǔ)體成分5a酶聯(lián)免疫試劑盒
適用樣品基質(zhì)
cell culture supernates, serum, and plasma.
保存條件
Store at 4°C for 6 months, at -20°C for 12 months. Avoid multiple freeze-thaw cycles (Shipped with wet ice.)
方法：雙抗夾心法
保質(zhì)期：12個(gè)月
測(cè)定長(zhǎng)度： 1-4.5小時(shí) 1-3.5小時(shí)
優(yōu)點(diǎn)：
有競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格。 預(yù)稀釋的檢測(cè)試劑A和B
高靈敏度。 減少進(jìn)行測(cè)試時(shí)的步驟數(shù)
高穩(wěn)定性。 所有試劑均可在4℃下保存
保質(zhì)期12個(gè)月。 與其他品牌相比反應(yīng)更快
保質(zhì)期12個(gè)月
包裝描述：
測(cè)定步驟總結(jié)
1.準(zhǔn)備所有試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品；
2.向每個(gè)孔中添加100µL標(biāo)準(zhǔn)液或樣品。在37℃下孵育2小時(shí)；
3.吸出并加入100µL準(zhǔn)備好的檢測(cè)試劑A。在37℃孵育1小時(shí)；
4.吸凈并清洗3次；
5.加入100µL制備的檢測(cè)試劑B。在37℃孵育1小時(shí)；
6.吸氣并清洗5次；
7.添加90µL底物溶液。在37℃下孵育15-25分鐘；
8.添加50µL終止液。立即在450nm處讀取。
需自備的設(shè)備及試劑
450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
單道或多道微量加液器及吸頭
稀釋樣品的EP管
蒸餾水或去離子水
吸水紙
盛放洗液的容器
試劑盒的儲(chǔ)存及有效期
未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。
使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。
穩(wěn)定性
經(jīng)測(cè)定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對(duì)試劑盒破壞前后檢測(cè)值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。
注意：
試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在首次實(shí)驗(yàn)后 1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題分析
ELISA實(shí)驗(yàn)因靈敏度高，特異性強(qiáng)在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可，但對(duì)初學(xué)者而言，如不注意實(shí)驗(yàn)操作過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)，可能會(huì)對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響，比如實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板，顯色弱靈敏度低，花板無梯度背景高等現(xiàn)象。下面對(duì)以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行一一解析。
1.白板現(xiàn)象
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中所有孔的顏色均為無色，即無信號(hào)呈現(xiàn)。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：
a.試劑已過保質(zhì)期，不同批次稀釋液交叉使用。
b.錯(cuò)加漏加檢測(cè)A，檢測(cè)B或者底物溶液TMB。
c.洗板或者加樣過程中，酶標(biāo)記物被污染失活，稀釋液中含有酶抑制劑如疊氮吶等。
d.配置稀釋液的蒸餾水可能被污染。
e.洗滌液是濃縮型的，沒有按比例進(jìn)行稀釋。
f.酶標(biāo)記物的活性和效價(jià)比較低。
g.溶液的PH值不正確，一般稀釋液的PH值應(yīng)保持在7.2-7.4。
2.顯色弱靈敏度低
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中孔的顯色比較淺，即只有微弱的信號(hào)呈現(xiàn)。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：
a.產(chǎn)品過有效期，試劑沒有按規(guī)定進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４妗?/p>
b.試劑，標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品在使用前沒有平衡到室溫。
c.少加了試劑的量或者加入試劑的稀釋比例不當(dāng)。
d.洗板或者加樣過程中，酶標(biāo)物受污染失活。
e.孵育時(shí)間和孵育溫度未達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。
f.洗滌液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗板次數(shù)過多，洗板沖擊力過大，洗板浸泡時(shí)間過長(zhǎng)。
g.底物溶液TMB顯色時(shí)間太短。
3.花板無梯度背景高
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中的孔有顏色但沒有梯度，背景也可能較高.
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：
a.底物溶液TMB未置于陰涼避光處保存，實(shí)驗(yàn)前溶液已經(jīng)變藍(lán)。
b.孵育溫度過高或者孵育時(shí)間過長(zhǎng)，發(fā)生了較強(qiáng)的非特異性吸附。
c.沒有按說明書要求洗板，特別是洗板時(shí)洗滌液的量少加了。
d.加樣時(shí)沒有換槍頭造成交叉污染。
e.花板現(xiàn)象：低濃度或者低活性的包被抗體或者檢測(cè)抗體，封閉不足導(dǎo)致的本底不穩(wěn)定，洗板不充分，包被板子的問題。
綜上所述：在ELISA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下問題：
1.在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該按相關(guān)要求將實(shí)驗(yàn)試劑平衡至室溫。
2.包被抗體和檢測(cè)抗體應(yīng)該是有高活性的且都針對(duì)同一抗原。
3.試劑保存：蛋白抗體類試劑保存于-20攝氏度，顯色液洗滌液保存于2-8攝氏度。
4.各試劑在使用前應(yīng)充分混勻，以保證試劑的均一性和準(zhǔn)確性。
5.嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑。
6.洗板次數(shù)，洗板液的量，洗板液浸泡時(shí)間的長(zhǎng)短，洗板的力度都是應(yīng)該注意的問題。
7.相關(guān)濃縮液應(yīng)按要求稀釋到相應(yīng)比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之間。
8.在終止反應(yīng)時(shí)盡量避免微孔中存有氣泡。
9.終止反應(yīng)完成后應(yīng)該在2min內(nèi)完成酶標(biāo)儀讀數(shù)。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
關(guān)鍵字： Complement Component C5a；人補(bǔ)體成分5a酶聯(lián)免疫試劑盒；Human Complement Component C5a ELISA KIT
上海康朗生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品。總部位于上海，并在北京、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。