人血小板衍化生長因子BB酶聯(lián)免疫試劑盒

方法：雙抗夾心法

保質(zhì)期：12個月

測定長度： 1-4.5小時 1-3.5小時

優(yōu)點：

有競爭力的價格。             預(yù)稀釋的檢測試劑A和B

高靈敏度。                   減少進行測試時的步驟數(shù)

高穩(wěn)定性。                   所有試劑均可在4℃下保存

保質(zhì)期12個月。              與其他品牌相比反應(yīng)更快

                             保質(zhì)期12個月

包裝描述：

測定步驟總結(jié)

1.準備所有試劑，樣品和標準品；

2.向每個孔中添加100µL標準液或樣品。在37℃下孵育2小時；

3.吸出并加入100µL準備好的檢測試劑A。在37℃孵育1小時；

4.吸凈并清洗3次；

5.加入100µL制備的檢測試劑B。在37℃孵育1小時；

6.吸氣并清洗5次；

7.添加90µL底物溶液。在37℃下孵育15-25分鐘；

8.添加50µL終止液。立即在450nm處讀取。

需自備的設(shè)備及試劑

450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)

單道或多道微量加液器及吸頭

稀釋樣品的EP管

蒸餾水或去離子水

吸水紙

盛放洗液的容器

試劑盒的儲存及有效期

未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

穩(wěn)定性

經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。

注意：

試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在首次實驗后 1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

ELISA實驗常見問題分析

ELISA實驗因靈敏度高，特異性強在生物科研上得到了廣泛的認可，但對初學(xué)者而言，如不注意實驗操作過程中的各個環(huán)節(jié)，可能會對最終的實驗結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響，比如實驗出現(xiàn)白板，顯色弱靈敏度低，花板無梯度背景高等現(xiàn)象。下面對以上實驗現(xiàn)象進行一一解析。

1.白板現(xiàn)象

在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中所有孔的顏色均為無色，即無信號呈現(xiàn)。

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：

a.試劑已過保質(zhì)期，不同批次稀釋液交叉使用。

b.錯加漏加檢測A，檢測B或者底物溶液TMB。

c.洗板或者加樣過程中，酶標記物被污染失活，稀釋液中含有酶抑制劑如疊氮吶等。

d.配置稀釋液的蒸餾水可能被污染。

e.洗滌液是濃縮型的，沒有按比例進行稀釋。

f.酶標記物的活性和效價比較低。

g.溶液的PH值不正確，一般稀釋液的PH值應(yīng)保持在7.2-7.4。

2.顯色弱靈敏度低

在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中孔的顯色比較淺，即只有微弱的信號呈現(xiàn)。

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：

a.產(chǎn)品過有效期，試劑沒有按規(guī)定進行適當?shù)谋４妗?/p>

b.試劑，標準品或者樣品在使用前沒有平衡到室溫。

c.少加了試劑的量或者加入試劑的稀釋比例不當。

d.洗板或者加樣過程中，酶標物受污染失活。

e.孵育時間和孵育溫度未達到實驗要求。

f.洗滌液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗板次數(shù)過多，洗板沖擊力過大，洗板浸泡時間過長。

g.底物溶液TMB顯色時間太短。

3.花板無梯度背景高

在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中的孔有顏色但沒有梯度，背景也可能較高.

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：

a.底物溶液TMB未置于陰涼避光處保存，實驗前溶液已經(jīng)變藍。

b.孵育溫度過高或者孵育時間過長，發(fā)生了較強的非特異性吸附。

c.沒有按說明書要求洗板，特別是洗板時洗滌液的量少加了。

d.加樣時沒有換槍頭造成交叉污染。

e.花板現(xiàn)象：低濃度或者低活性的包被抗體或者檢測抗體，封閉不足導(dǎo)致的本底不穩(wěn)定，洗板不充分，包被板子的問題。

綜上所述：在ELISA實驗中應(yīng)注意以下問題：

1.在實驗前應(yīng)該按相關(guān)要求將實驗試劑平衡至室溫。

2.包被抗體和檢測抗體應(yīng)該是有高活性的且都針對同一抗原。

3.試劑保存：蛋白抗體類試劑保存于-20攝氏度，顯色液洗滌液保存于2-8攝氏度。

4.各試劑在使用前應(yīng)充分混勻，以保證試劑的均一性和準確性。

5.嚴格控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑。

6.洗板次數(shù)，洗板液的量，洗板液浸泡時間的長短，洗板的力度都是應(yīng)該注意的問題。

7.相關(guān)濃縮液應(yīng)按要求稀釋到相應(yīng)比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之間。

8.在終止反應(yīng)時盡量避免微孔中存有氣泡。

9.終止反應(yīng)完成后應(yīng)該在2min內(nèi)完成酶標儀讀數(shù)。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！