信裕生物的人基因開(kāi)放閱讀框(ORF)庫(kù)(Human Open Reading Frame library)包含約15,000個(gè)人基因ORF克隆，其中包括已知的基因約12,000種。本人基因ORF庫(kù)的每一種質(zhì)粒都來(lái)自于單克隆，并且每一個(gè)ORF都經(jīng)過(guò)了測(cè)序驗(yàn)證。后續(xù)使用Gateway系統(tǒng)或PCR反應(yīng)即可非常方便地克隆目的基因到新的表達(dá)載體中。
      本人基因ORF庫(kù)的克隆在供體載體(Donor vector) pDONR223中，其圖譜如圖1所示。

圖1. pDONR223質(zhì)粒圖譜。 pDONR223的全序列信息：pDONR223-seq.txt。

      ORF克隆是指起始密碼子和終止密碼子之間的編碼序列，而不包含mRNA的5’和3’端的非編碼區(qū)(untranslated region, UTR)。本ORF庫(kù)是通過(guò)mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的編碼蛋白質(zhì)的cDNA，再通過(guò)Gateway技術(shù)的BP重組反應(yīng)克隆到pDONR223載體中得到入門(mén)載體，其重組位點(diǎn)的序列如圖2所示。為了便于后續(xù)利用Gateway系統(tǒng)添加適當(dāng)?shù)?’標(biāo)簽，所有的克隆都無(wú)終止密碼子。在信裕生物的人基因ORF庫(kù)中，每一個(gè)克隆都代表一個(gè)獨(dú)立的插入序列，隨機(jī)挑取克隆測(cè)序，準(zhǔn)確率為95%，但較長(zhǎng)基因克隆準(zhǔn)確率略差。

圖2. ORF兩側(cè)的重組序列

      信裕生物的人基因ORF庫(kù)提供的是含有相應(yīng)ORF質(zhì)粒的大腸桿菌甘油菌(DH5α)，本產(chǎn)品一套共169 塊96孔板?？寺≥d體為
pDONR223，載體抗性spectinomycin，推薦使用終濃度為50μg/ml。正向測(cè)序M13F引物序列為GTAAAACGACGGCCAGT，反向測(cè)序T7引物序列為T(mén)AATACGACTCACTATAGG。
      人基因開(kāi)放閱讀框(ORF)庫(kù)基因清單請(qǐng)點(diǎn)擊下載。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存，二年有效。-80℃保存，五年有效。
注意事項(xiàng)：
      pDONR223載體不能直接在細(xì)菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)相應(yīng)蛋白，需要重新克隆至相應(yīng)表達(dá)載體才能表達(dá)。
      本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。使用說(shuō)明：
1. 根據(jù)所需人基因ORF的名稱(chēng)，查詢(xún)并選取相應(yīng)的96孔板及孔進(jìn)行菌種的接種培養(yǎng)。
a. 劃平板隨后挑取單克隆培養(yǎng)：取出對(duì)應(yīng)的96孔板置于冰上，并在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行后續(xù)操作。等菌液稍融化，撕開(kāi)封口膜，并小心揭開(kāi)96孔板板蓋，注意不要交叉污染。按照如下方法之一劃平板接種，隨后挑取單克隆接種到含抗生素的LB中培養(yǎng)。
(a) 用鑷子和塑料槍頭操作：鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無(wú)菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個(gè)無(wú)菌的200微升塑料槍頭，蘸取少量DH5α甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料槍頭，以盡量和LB平板接近平行的角度，在含50μg/ml spectin omycin的LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動(dòng)，再用一無(wú)菌的200微升塑料槍頭，在原先的劃線上以90或120度角，再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動(dòng)。通常換槍頭重復(fù)操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜。
(b) 用接種環(huán)操作：將接種環(huán)在酒精燈上略略燒一下，使接種環(huán)處于無(wú)菌狀態(tài)。微冷后，蘸取少量DH5α甘油菌，在含50μg/ml spectinomycin LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動(dòng)。把接種環(huán)再燒一下，微冷后，在原先的劃線上以90或120度角，再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動(dòng)。通常用接種環(huán)重復(fù)操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜。
b. 直接培養(yǎng)：取出對(duì)應(yīng)的96孔板置于冰上，并置于超凈臺(tái)內(nèi)，后續(xù)操作都在超凈臺(tái)內(nèi)操作。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無(wú)菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個(gè)無(wú)菌的塑料槍頭或牙簽，蘸取少量DH5α甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料槍頭或牙簽放到裝有3毫升含50μg/ml spectinomycin 的LB細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)或裝有100毫升或更大體積LB的細(xì)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。37℃，約200rpm培養(yǎng)過(guò)夜。
2. 對(duì)于培養(yǎng)的菌液進(jìn)行質(zhì)粒的小量、中量或大量抽提。
3. 重組或PCR克隆：人基因ORF庫(kù)的每一個(gè)蛋白質(zhì)編碼序列兩端有特異的重組序列。通過(guò)LR重組反應(yīng)可以將ORF轉(zhuǎn)移到特定接收載體中，例如Gateway系統(tǒng)的pDEST系列載體等，從而使目的基因在大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞或哺乳細(xì)胞等中表達(dá)；也可以此ORF庫(kù)作為模板用PCR或其它常規(guī)方法克隆到其它蛋白表達(dá)載體中用于在細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等中的表達(dá)