哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒

信裕生物生產的哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)，采用了經典的蛋白酶K處理法，可以抽提到100-150kb以上的基因組DNA。
用本試劑盒抽提到的基因組DNA適用于Southern雜交、基因組DNA的PCR擴增及基因組DNA文庫的構建等。
通常使用本試劑盒，從20毫克組織可以抽提到約40微克基因組DNA，從10⁶-10⁷Hela細胞可以抽提到約5-50微克基因組DNA。
本試劑盒足夠抽提50個常規(guī)量的樣品。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。10M醋酸銨和Nuclease Free Water也可以室溫保存。
注意事項：
需自備Tris平衡苯酚、氯仿和無水乙醇。
如果打算抽提到大片段的基因組DNA，則要盡量避免基因組DNA的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA的樣品，可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取含有基因組DNA的樣品。
不可過分干燥基因組DNA沉淀，否則會極難溶解。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。使用說明：
1. 樣品收集
a. 對于組織樣品：
切下組織，并剪切成小塊，置液氮中凍結，研碎或搗碎。
b. 對于貼壁細胞：
胰酶消化后，PBS或生理鹽水洗一次，1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細胞。
c. 對于懸浮細胞：
1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細胞。
2. 基因組DNA抽提
a. 樣品處理完畢后，每1毫升樣品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混勻。
b. 對于上述處理好的樣品，每20毫克組織或10⁶-10⁷個細胞中加入500微升添加了蛋白酶K的樣品裂解液，顛倒混勻數(shù)次，充分裂解組織或細胞。
c. 50℃水浴消化過夜。
d. 加入500微升Tris平衡苯酚抽提樣品。
e. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積Tris平衡酚再抽提一次。
f. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積氯仿再抽提一次。
g. 吸出約300微升上清液，加入60微升10M醋酸銨和600微升無水乙醇，顛倒數(shù)次混勻，此時可見DNA沉淀產生。
h. 10,000g 離心1分鐘，棄上清。加入70%乙醇洗滌DNA沉淀兩次。
i. 盡量吸除殘余的乙醇，待看不到明顯的液體時，立即加入50-100微升Nuclease Free Water溶解DNA。注意：不可過分干燥基因組DNA沉淀，否則會極難溶解。如果發(fā)現(xiàn)DNA沉淀難以溶解，可以在4℃用搖床緩慢搖動過夜，以溶解DNA沉淀。