EMSA/Gel-Shift 結(jié)合緩沖液(5X)

EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)(EMSA/Gel-Shift Binding Buffer,5X)是用于EMSA/Gel-Shift的結(jié)合緩沖液。通過(guò)EMSA，也稱gel-shift，可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的結(jié)合情況，從而可以研究細(xì)胞內(nèi)一些轉(zhuǎn)錄因子的激活水平。EMSA/Gel-Shift 結(jié)合緩沖液(5X)可以用于EMSA研究時(shí)細(xì)胞核蛋白或純化的轉(zhuǎn)錄因子和特定的雙鏈寡核苷酸的結(jié)合反應(yīng)。
EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)中含有poly(dI-dC)，DTT，甘油，EDTA，氯化鈉，氯化鎂以及Tris等有效成分。其中poly(dI-dC)的濃度經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可以很好的消除蛋白和標(biāo)記探針間的非特異性結(jié)合，同時(shí)又不會(huì)減弱目的轉(zhuǎn)錄因子和標(biāo)記探針間的結(jié)合。
本EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)不僅適用于同位素標(biāo)記的探針，也適用于(digoxin)或生物素(biotin)標(biāo)記的探針。
每個(gè)包裝的EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)，足夠進(jìn)行100個(gè)蛋白和探針的結(jié)合反應(yīng)。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
需自備EMSA相關(guān)的所有其它試劑。
請(qǐng)仔細(xì)閱讀完整個(gè)說(shuō)明書后，再開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 
使用說(shuō)明：
1. 參考下面的反應(yīng)體系使用EMSA/Gel-Shift 結(jié)合緩沖液(5X)：
(1) 如下設(shè)置EMSA結(jié)合反應(yīng)(預(yù)期的結(jié)果參見(jiàn)圖1)：

(2) 按照上述順序依次加入各種試劑，在加入標(biāo)記好的探針前先混勻，并且室溫(20-25℃)放置10分鐘，從而消除可能發(fā)生的探針和蛋白的非特異性結(jié)合，或者讓冷探針優(yōu)先反應(yīng)。然后加入標(biāo)記好的探針，混勻，室溫(20-25℃)放置20分鐘。

(3) 加入1微升EMSA/Gel-Shift上樣緩沖液(無(wú)色，10X)，混勻后立即上樣。

注意：有些時(shí)候溴酚藍(lán)會(huì)影響蛋白和DNA的結(jié)合，建議盡量使用無(wú)色的EMSA/Gel-Shift上樣緩沖液。如果對(duì)于使用無(wú)色上樣緩沖液在上樣時(shí)感覺(jué)到無(wú)法上樣，可以在無(wú)色上樣緩沖液里面添加極少量的藍(lán)色的上樣緩沖液，至能觀察到藍(lán)顏色即可。

2. 電泳分析：EMSA的典型分析結(jié)果可以參見(jiàn)下面的圖1。 

圖1.一個(gè)典型的EMSA/Gel-Shift分析圖 
1,陰性對(duì)照反應(yīng)(標(biāo)記探針)；

2,常規(guī)反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標(biāo)記探針)；

3,探針冷競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標(biāo)記探針+標(biāo)記探針100倍量的未標(biāo)記探針)；

4,突變探針的冷競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標(biāo)記探針+標(biāo)記探針100倍量的未標(biāo)記突變探針)；

5,Super-shift反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標(biāo)記探針+目的轉(zhuǎn)錄因子的特異抗體)。