EMSA/Gel-Shift 結(jié)合緩沖液(5X)
EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)(EMSA/Gel-Shift Binding Buffer,5X)是用于EMSA/Gel-Shift的結(jié)合緩沖液。通過EMSA，也稱gel-shift，可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的結(jié)合情況，從而可以研究細胞內(nèi)一些轉(zhuǎn)錄因子的激活水平。EMSA/Gel-Shift 結(jié)合緩沖液(5X)可以用于EMSA研究時細胞核蛋白或純化的轉(zhuǎn)錄因子和特定的雙鏈寡核苷酸的結(jié)合反應。
EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)中含有poly(dI-dC)，DTT，甘油，EDTA，氯化鈉，氯化鎂以及Tris等有效成分。其中poly(dI-dC)的濃度經(jīng)過優(yōu)化，可以很好的消除蛋白和標記探針間的非特異性結(jié)合，同時又不會減弱目的轉(zhuǎn)錄因子和標記探針間的結(jié)合。
本EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)不僅適用于同位素標記的探針，也適用于(digoxin)或生物素(biotin)標記的探針。
每個包裝的EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)，足夠進行100個蛋白和探針的結(jié)合反應。
包裝清單：
KL-005
EMSA/Gel-Shift結(jié)合緩沖液(5X)
200μl
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項：
需自備EMSA相關的所有其它試劑。
請仔細閱讀完整個說明書后，再開始實驗操作。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 參考下面的反應體系使用EMSA/Gel-Shift 結(jié)合緩沖液(5X)：
(1) 如下設置EMSA結(jié)合反應(預期的結(jié)果參見圖1)：
(2) 按照上述順序依次加入各種試劑，在加入標記好的探針前先混勻，并且室溫(20-25℃)放置10分鐘，從而消除可能發(fā)生的探針和蛋白的非特異性結(jié)合，或者讓冷探針優(yōu)先反應。然后加入標記好的探針，混勻，室溫(20-25℃)放置20分鐘。
(3) 加入1微升EMSA/Gel-Shift上樣緩沖液(無色，10X)，混勻后立即上樣。
注意：有些時候溴酚藍會影響蛋白和DNA的結(jié)合，建議盡量使用無色的EMSA/Gel-Shift上樣緩沖液。如果對于使用無色上樣緩沖液在上樣時感覺到無法上樣，可以在無色上樣緩沖液里面添加極少量的藍色的上樣緩沖液，至能觀察到藍顏色即可。
2. 電泳分析：EMSA的典型分析結(jié)果可以參見下面的圖1。
圖1.一個典型的EMSA/Gel-Shift分析圖
1,陰性對照反應(標記探針)；
2,常規(guī)反應(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標記探針)；
3,探針冷競爭反應(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標記探針+標記探針100倍量的未標記探針)；
4,突變探針的冷競爭反應(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標記探針+標記探針100倍量的未標記突變探針)；
5,Super-shift反應(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標記探針+目的轉(zhuǎn)錄因子的特異抗體)。
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上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學，分子生物學等高生物產(chǎn)品。總部位于上海，并在北京、廣東，江西，吉林等全國30多個省市設有分公司和代理機構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學院、清華、北大、復旦，上海交大，復旦醫(yī)學院，上海中醫(yī)藥大學，華東師范大學，第二軍醫(yī)大學，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務確。