胰蛋白酶溶液(0.25%)

細(xì)胞氧化應(yīng)激的定量評(píng)價(jià)方法大致分做三類：

1）測(cè)定由活性氧修飾的化合物；

2）測(cè)定活性氧消除系統(tǒng)酶和抗氧化物質(zhì)的量；

3）測(cè)定含有轉(zhuǎn)錄因子的氧化應(yīng)激指示物。

進(jìn)一步尚有：

1）生物體內(nèi)氧化應(yīng)激的程度足以產(chǎn)生應(yīng)答；

2）活體內(nèi)難以蓄積；

3）在活體內(nèi)不是被代謝，而是穩(wěn)定存在，等等。理解這些要點(diǎn)對(duì)于臨床普及推廣都很有用。

細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟
是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測(cè)法。CCK法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。下面以engreen的CCK8試劑盒為例，簡(jiǎn)要說明細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)的操作步驟
方法/步驟
在96孔板中配制100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (在 37℃，5% CO2 的條件下)。
向培養(yǎng)板加入 10μl 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時(shí))。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。
如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化 。

細(xì)胞周期檢測(cè)的原理：

PI法是經(jīng)典的周期檢測(cè)方法。PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，就可以得到細(xì)胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài)，從而計(jì)算出各個(gè)期的百分含量。PI染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。

常用的細(xì)胞染色方法有:

1.簡(jiǎn)單染色法,常用堿性染料如美藍(lán)等進(jìn)行簡(jiǎn)單染色;

2.革蘭氏染色法,主要包括結(jié)晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復(fù)染四個(gè)過程;

3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶劑主要是由伊紅美藍(lán)組成;

4.吉姆薩染色法,吉姆薩染色原理與結(jié)果和瑞特染色法基本相同;

5.細(xì)胞免疫熒光染色法,免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合。

蛋白提取/定量

蛋白提取頻道,提供蛋白提取實(shí)驗(yàn)用蛋白提取試劑盒，蛋白裂解液，蛋白濃度測(cè)定試劑盒等蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)用試劑及耗材。其中蛋白提取系列包括：植物蛋白提取試劑盒，細(xì)胞組織蛋白提取試劑盒，胞膜/細(xì)胞核蛋白提取試劑盒，全蛋白提取試劑盒等。