一站式SDS-PAGE蛋白電泳套裝

產(chǎn)品及特點(diǎn)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主 要方法，但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣，為此基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具 有下列特點(diǎn):

1. 一站式，即開(kāi)即用，用戶(hù)不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。

2. 安全，將實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。

3. 靈活，分開(kāi)提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度 的 SDS-PAGE，滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
 規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝保存溫度
丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺
干粉(19:1)分子80810a250mL 棕色玻璃（60 g/3g）RT
分離膠緩沖液，4× 分子100868 200 mL RT
濃縮膠緩沖液，4×（含染料） 分子100867 100 mL RT
TEMED 100880 1.5 mL 4℃
過(guò)硫酸銨（干粉） 100879 1 g RT
SDS-PAGE 上樣液，5× 81204 1 套（1 mL） -20℃
SDS-PAGE 電泳液（干粉） 81203 1 套（20 L） RT
使用手冊(cè) 80810sc 1 份 RT

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上樣液需低溫運(yùn)輸，分別在4℃ 和-20℃有效期一年。 自備試劑 去離子水 

使用方法

1. 一次使用本產(chǎn)品時(shí)需先配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺（19:1）溶液(30% AB 溶液，下同):在本產(chǎn)品提供的裝有 60 克丙烯酰胺/3g 甲叉雙丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL 自備的去離子水，充分搖晃 10-20 分

鐘即得 200 mL 30%丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺（19:1）溶液（以下簡(jiǎn)稱(chēng)30%AB 溶液）。丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺比例在 19:1 時(shí)，PAGE 膠的孔徑最小，分辨率高。配好的 30%ＡＢ溶液好 4℃避光保存并在１月

內(nèi)用完。

2. 根據(jù)平板的面積和膠的厚度估計(jì)需要配制的濃縮膠和分離膠的體積。并根據(jù)要分離的蛋白質(zhì)的大小確定選擇濃縮膠和分離膠的濃度，參考下表：蛋白質(zhì)大小范圍（kD） 佳濃縮膠濃度 佳分離膠濃度

15-45 4% 15%

15-60 4% 12.5%

18-75 4% 10%

30-120 4% 7.5%

60-200 不需要 5%

注：如果上樣體積少于 10uL，可以不需要濃縮膠。

3. 配制 10%的 APS（過(guò)硫酸銨）：稱(chēng) 0.1 克過(guò) APS 干粉到 1 mL 去離子水中，搖晃溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。4. 配制分離膠：在一個(gè) 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%的 AB 溶液和 4×分離膠緩沖液。以下是配制 10 mL 膠的用量，更大體積則各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操

作。

分離膠

濃度

用量（單位：mL）

水 30%AB 溶液 4×分離膠配膠液

5% 5.83 1.67 2.50

6% 5.50 2.00 2.50

7% 5.17 2.33 2.50

7.5% 5.00 2.50 2.50

8% 4.83 2.67 2.50

9% 4.50 3.00 2.50

10% 4.17 3.33 2.50

11% 3.83 3.67 2.50

12% 3.50 4.00 2.50

13% 3.17 4.33 2.50

14% 2.83 4.67 2.50

15% 2.50 5.00 2.50

16% 2.17 5.33 2.50

5. 配制濃縮膠（一般使用 4%的濃度）：在一個(gè) 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和 4×濃縮膠緩沖液。以下是配制 10 mL

４％濃縮膠的用量，丙烯酰胺溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

濃縮膠

濃度

用量（單位：mL）

水 30%AB 溶液

4×濃縮膠緩沖液

（含藍(lán)色染料）

4% 6.17 1.33 2.50

6. 將分離膠和濃縮膠溶液搖晃混勻，抽真空 10-15 分鐘以去除溶液中的氧氣（氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng)，不去除將影響丙烯酰胺聚合反應(yīng)）。

7. 分別加入 50 uL 10%APS 和 30-50 uL TEMED（這是配制 10 mL 分離膠和濃縮膠的用量，更大體積的膠則用量需按比例增加），迅速搖勻。

8. 先灌分離膠，在膠的液面距離頂部 1.5 cm 的時(shí)候，停止灌膠。

9. 由于分離膠比重較大，可以立即在上面灌濃縮膠，但灌注時(shí)必須小心，不要破壞分離膠和濃縮膠的液面，在濃縮膠液面達(dá)到頂部時(shí)停止灌膠，插入梳子，室溫聚合 30-60 分鐘。如果不能做到小心灌濃縮膠，則必須待分離膠室溫聚合 30-60 分鐘后再灌制。

10. 拔出梳子，用 1×SDS-PAGE 電泳液沖洗加樣孔。

11. 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽加入足夠的 1×SDS-PAGE 電泳液。本產(chǎn)品提供 20 升的 SDS-PAGE 電泳液干粉，將所有干粉溶解在 2L 水中即得 10×SDS-PAGE 電泳液（測(cè) pH 應(yīng)該在 8.3，如果不是 8.3請(qǐng)用 NaOH 或 HCl 調(diào)到 8.3），用時(shí)再稀釋成 1×工作液。

12. 在蛋白質(zhì)樣品中加入5×SDS-PAGE上樣液（4uL樣品中加1uL上樣液），100℃煮沸 3-5 分鐘。短暫離心，取上清上樣。

13. 先用 10 mA 的電流電泳（對(duì) 0.75 mm 厚×14 cm×14 cm 的膠）直到染料進(jìn)入從濃縮膠進(jìn)入分離膠。

14. 將電流增加到 15 mA，直到染料進(jìn)入分離膠底部時(shí)終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)處理。

4. 使用改良的濃縮膠緩沖液，由于其含有染料，制備的濃縮膠呈藍(lán)色，便 于上樣時(shí)識(shí)別加樣孔。

5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)