檸檬酸鈉緩沖液0.01mol/L，pH6.0 說明書  
貨號：PN5360
規(guī)格：1L/2L 
保存：室溫密封保存，有效期12個月。
產(chǎn)品簡介：
細(xì)胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后，會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽，導(dǎo)致免疫染色時染色信號減弱，甚至出現(xiàn)一些假陰性染色結(jié)果。所以要求在進(jìn)行免疫組化染色時，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。從而提高抗原的檢出率，降低背景染色，提高檢測的準(zhǔn)確性。
檸檬酸鈉緩沖液0.01mol/L，pH6.0 是一種常用的抗原修復(fù)液，可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)。可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。
通常石蠟切片都需進(jìn)行抗原修復(fù)處理，而冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù)處理?？乖迯?fù)可以提高石蠟切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰凍切片的染色效果。當(dāng)冰凍切片免疫染色效果不理想時，考慮進(jìn)行抗原修復(fù)。
按每個片子需要10ml抗原修復(fù)液計算，1L抗原修復(fù)液可用于100個樣本的抗原修復(fù)。
操作步驟：
本產(chǎn)品是干粉形式，使用前用去離子水或蒸餾水按產(chǎn)品規(guī)格溶解至1L/2L，即可使用。
1. 對于石蠟切片：
a. 脫蠟：二甲苯3 次，每次3-5min→ 無水乙醇2 次，每次3-5min→ 95％乙醇1 次，3-5min→ 90%乙醇1次，3-5min→ 75％乙醇1 次，3-5min→ 蒸餾水洗2 次，每次3-5min。
b. 抗原修復(fù)：將切片浸泡在檸檬酸修復(fù)液中，95-100℃加熱約15 min (加熱時間可以控制在10-20 min 內(nèi)，的加熱時間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。檸檬酸修復(fù)液使用前需預(yù)熱到95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋，也可以使用微波爐加熱。如果使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在20-30 min 內(nèi)冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌1-2 次，每次3-5 min。隨后即可進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。
2. 對于冰凍切片：
用免疫染色洗滌液洗滌切片5 min。將切片浸泡在檸檬酸修復(fù)液中，95-100℃加熱約15 min (加熱時間可以控制在10-20 min 內(nèi)，的加熱時間需根據(jù)不同的樣品和目的蛋白自行摸索)。檸檬酸修復(fù)液使用前需預(yù)熱到95-100℃。加熱可以使用普通的水浴鍋，也可以使用微波爐加熱。如果使用微波爐加熱，需注意避免暴沸和過多的水分蒸發(fā)。隨后大約在20-30 min 內(nèi)冷卻至室溫。用免疫染色洗滌液洗滌1-2 次，每次3-5 min。隨后即可進(jìn)行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。
3. 對于其它樣品的抗原修復(fù)，可以參考石蠟切片或冰凍切片的步驟進(jìn)行。
注意事項：
抗原修復(fù)過程可以使用金克隆公司的抗原修復(fù)盒進(jìn)行操作。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴手套操作。