Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL
產(chǎn)品及特點(diǎn)Klenow 片段是大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解產(chǎn)物。它保留了 DNA 聚合酶活性，具有 3’→ 5’外切酶活性，但不具有 5´→3´ 外切核酸酶活性?？?以在 DNA 模板和引物存在的條件下，選擇性地催化底物 dNTP 沿 5’→ 3’方向 合成與模板互補(bǔ)的 DNA。本產(chǎn)品是重組表達(dá)得到，它具體有下列用途：

1. 雙鏈 DNA5’突出末端的平滑化。

2. 用隨機(jī)引物制備探針。

3. 隨機(jī)引物標(biāo)記法。

4. 寡核苷酸定向誘變（Oligonucleotide directed mutagenesis）中雙鏈 DNA 的合成。 5. 雙脫氧法 DNA 序列測定（Sanger 法）。
Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL
規(guī)格及成分 成 份 編號(hào) 200U 塑料袋包裝
Klenow 片段（5U/uL） 131015A 20 uL
10×Klenow Fragment Buffer 131015B 1 mL
使用手冊 1 份
活性定義： 以合成的 Poly d(A-T) DNA 為模板/引物，在 37℃、pH7.4 的條件下，30 分鐘內(nèi)使 10 nmol 的全核苷酸摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為 1 個(gè)活性單位(unit)。
活性定義反應(yīng)液：67mM 磷酸鉀、pH7.4、6.7 mM MgCl2、0.1mM DTT、20uMDNA 模板、33 uM dATP，33uM【3H】dTTP純度：
1. 10 units 的本產(chǎn)品和 1 μg 的超螺旋 pBR322 DNA(Form I)在 37℃下反應(yīng) 1小時(shí)，DNA 的電泳譜帶不發(fā)生變化。
2. SDS-PAGE：＞95%。酶儲(chǔ)存 buffer：50 mM 磷酸鉀，pH 6.5，1 mM DTT，50%甘油10×Klenow Fragment Buffer： 100 mM Tris-HCl，pH7.5、70 mM MgCl2、1 mM DTT。注意：本 buffer 可用于標(biāo)記或末端平化等常規(guī)實(shí)驗(yàn)，與活性定義所用的 buffer 組成不同。

Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 模板 DNA；引物

使用方法 使用舉例：隨機(jī)引物的同位素標(biāo)記反應(yīng)

1. 在微量離心管中配制下列反應(yīng)液

2. 95℃保溫 3 分鐘。然后冰中急冷 5 分鐘。

3. 加入 2.5 μl 10×Klenow Fragment Buffer。

4. 加入 2.5 μl dNTP (0.2 mM dATP,dGTP,dTTP)。

5. 加入 5 μl 111 TBq/mmol [α32P].dCTP3000 Ci/mmol)(1.85 MBq, 50μCi)

6. 加入 1 μl 本產(chǎn)品，反應(yīng)液共 25 μl。

7. 37℃反應(yīng) 3 小時(shí)。

65℃加熱 5 分鐘。反應(yīng)液可直接作為探針使用。如有必要，可以通過用

柱式探針純化試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記的 dCTP。