高效RIPA組織/細(xì)胞裂解液使用說明書
貨號：EX6010
規(guī)格：20mL/100mL
本產(chǎn)品配有一支PMSF（100mM，1.5mL）
保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存，有效期1年。
使用說明：
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。
1、樣品前處理：
a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。
c)對于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
2、后處理：
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
注意事項：
本試劑為強烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，若細(xì)胞量多會造成細(xì)胞裂解液粘稠：此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可加入少量 SDS（1%），煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。
如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。
相關(guān)產(chǎn)品：
20×PBS緩沖液（0.01M *20，pH7.2-7.4）
Bradford法蛋白濃度測定試劑盒 2500微孔
彩虹130廣譜蛋白Marker（15-130KD)
(All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物
關(guān)鍵字： RIPA；蛋白裂解液；
金克隆生物公司位于北京經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)，主要從事生物醫(yī)藥試劑的研發(fā)和生產(chǎn)，并兼營部分生化試劑和儀器耗材，主營方向有細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、蛋白與免疫、組織學(xué)、微生物培養(yǎng)等相關(guān)試劑與耗材。庫存現(xiàn)貨10000多種，其中我公司自主開發(fā)的分子生物學(xué)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測試劑、分子免疫學(xué)產(chǎn)品等在質(zhì)量和價格方面具有較大的市場優(yōu)勢，歡迎廣大經(jīng)銷商洽談合作。