超快DNA-RNA兩用轉(zhuǎn)膜試劑盒

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品是基于毛細管轉(zhuǎn)膜法的 Southern 和 Northern 印跡膜制備試劑， 專門用于從電泳得到的凝膠中制備用于 Southern 雜交和 Northern 雜交的 印跡膜。本產(chǎn)品具有下列特點：

1. 即開即用，提供制備 5 次 Southern 或 Northern 轉(zhuǎn)膜（13×20cm）所 需要的轉(zhuǎn)膜液。

2. 快速：轉(zhuǎn)膜過程只需要 1 小時，整個過程（加上變性和中和等步驟）只 需要 2.5 小時(對 DNA)或 1.5 小時（對 RNA）。

3. 跟硝酸纖維素膜、帶電尼龍膜、中性尼龍膜和 PVDF 膜兼容。包括Nytron、 Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon 等。

4. 硝酸纖維素膜適用于最小長度在 400bp 以上的靶分子，帶電尼龍膜適用 于最小長度在 40bp 以上的靶分子。

5. 使用優(yōu)化的下向轉(zhuǎn)膜法，不但效率比上行轉(zhuǎn)膜法高 30%左右，而且條帶 彌散度低、分辨率高。

6. 可用瓊脂糖膠（包括脈沖電泳膠，DNA 電泳、RNA 甲醛膠電泳和 RNA 戊二醛電泳）和 DNA PAGE 膠。 
規(guī)格及成分 成份 編號 大紙盒包裝
成分 A LM121110A 660 g
溶液 B LM121110B 100 mL
中和液 LM121110C 50 mL×5
使用手冊 LM121110sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸及保存，有效期 1 年。

自備試劑 瓊脂糖電泳試劑、去離子水、印跡膜（硝酸纖維素膜或尼龍膜） 

使用方法 一：Southern 印跡膜的制備（DNA 轉(zhuǎn)膜，中性尼龍膜，硝酸纖維素膜）

1. 按常規(guī)方法進行電泳（包括脈沖電泳），本試劑盒不提供電泳所需試劑。如果進行常規(guī)的 Southern 雜交，建議使用 0.7%瓊脂糖進行電泳，分離酶切的基因組 DNA。電泳時好加電泳分子量對照、酶切對照（先將標記的全長 lambda DNA 或探針質(zhì)粒與樣品 DNA 的混合，再酶切）、陰性樣品（不含 檢測片段 的 DNA 樣 品）、雜 交分子量 對照（標 記的lambda/Hind III）等。電泳后和熒光標尺并排拍照。

2. 變性：首次使用時需配制變性液 2.5L（在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約2L 自備的去離子水，攪拌緩慢中加入 220g 成分 A 和 100 mL 溶液 B，溶解后定容到 2.5L 后即可用），將凝膠轉(zhuǎn)移到一個至少含 10 倍于膠體積的變性液中，脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 60 分（如果使用帶正電尼龍膜，此步處理可以縮短到 30 分鐘）。未用完的變性液可放瓶中室溫保存。

3. 配制轉(zhuǎn)膜液：如果使用帶正電的尼龍膜，則直接用上步配制的變性液轉(zhuǎn)膜如果使用中性尼龍膜和硝酸纖維素膜，則需配置轉(zhuǎn)膜液（在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約 2L 自備的去離子水，緩慢攪拌中加入 440g 成分 A 和 2mL 溶液 B，溶解后定容到 2.5L 后即可用）。將凝膠轉(zhuǎn)移到至少 10 倍于凝膠體積的轉(zhuǎn)膜液中，脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 15 分。

4. 設置轉(zhuǎn)膜體系：測量凝膠的大小，然后借助尺子準確切出一張印跡膜，每邊比凝膠大 1mm，并切去一角，將印跡膜漂浮于去離子水上 20 分鐘確保全部濕潤，再按下圖設置下行轉(zhuǎn)膜體系（比上行轉(zhuǎn)膜體系效率高 30%）。圖中 membrane 即印跡膜，transfer buffer 即轉(zhuǎn)膜液，吸水濾紙厚度為 2-3cm，一般按每 cm2 印跡膜需要 1 mL 轉(zhuǎn)膜液的比例準備轉(zhuǎn)膜液。對大的凝膠，可以同時使用兩張濾紙分別跟兩個容器的轉(zhuǎn)膜液連接以便使轉(zhuǎn)膜勻漿。

5. 洗膠：凝膠轉(zhuǎn)移到一個含至少 10 倍于膠體積的轉(zhuǎn)膜液中，脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 15 分。

6. 轉(zhuǎn)膜：常溫轉(zhuǎn)膜 1 小時。結(jié)束后用鉛筆標記印跡膜的核酸結(jié)合面以免搞錯。注意：不要過夜轉(zhuǎn)膜，否則信號將降低 50%。

7. 中和：將印跡膜在中和液中處理 10 分鐘，中和液的用量至少為 0.5mL/cm2印跡膜。中和液容易長細菌，不建議長期放置。

8. 檢測效果：可將凝膠放入 EB（0.5ug/mL）溶液中染色 30 分鐘后 UV下觀察殘留核酸的量，反推轉(zhuǎn)膜效率。此步也可跳過。也可以另購印跡膜染液（CAT#:70104-100）處理印跡膜，日光下觀察轉(zhuǎn)膜效果。

9. 固定：將印跡膜夾在兩層濾紙中間 80℃干燥 15 分鐘以固定核酸（不需真空），干燥時間不需延長，否則雜交信號可能會降低。

10. 此時印跡膜可直接用于后續(xù)的核酸雜交實驗或者在干燥狀態(tài)下保存待用（可放數(shù)月）。

二：Southern 印跡膜的制備（帶正電尼龍膜，DNA 轉(zhuǎn)膜）

11. 電泳步驟同第 1 步。

12. 變性：同第 2 步，只是時間縮短到 30 分鐘。

13. 配制轉(zhuǎn)膜液：不需配制，直接用變性液轉(zhuǎn)膜。

14. 其余處理同第 4 步到第 10 步。

三：Northern 印跡膜的制備（RNA 轉(zhuǎn)膜）

15. 按常規(guī)方法進行電泳，本試劑盒不提供電泳所需試劑。本方法適用于甲醛變性膠和乙二醛變性膠，電泳后和熒光標尺并排拍照。

16. 凝膠不需要變性和洗膠處理（也不能變性，否則 RNA 將會降解），電泳后直接進入轉(zhuǎn)膜步驟，完全按第 6 到第 10 步處理。