填入法DNA探針地高辛末端標記試劑盒

原理及特點本產品是基于 DNA 聚合酶能夠在 DNA 粘性末端的 3’凹端摻入 dNTP的原理而設計，該反應的示意圖如下：本產品是在上述原理的基礎上開發(fā)的，具有下列特點：

1. 快速，15 分鐘即可完成標記反應。

2. 可用于任何 3’凹端的 DNA 片段。

3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛標記的核苷酸等）。

4. 提供不帶標記核苷酸、帶生物素標記核苷酸和帶地高辛標記核苷酸三種

選擇。

5. 同時提供非標記的 dNTP，用戶可以根據粘性末端序列使用。

6. 標記的探針可用于電泳遷移率實驗（EMSA）、原位雜交（ISH）、Northern

Blot（不推薦用于低豐度 RNA 檢測）、小 RNA Northern、Southern Blot

（不推薦用于單拷貝基因檢測）、菌落雜交、斑點印跡雜交分析等。

7. 本產品足夠 5 次 20uL 體系的標記反應。

8. 本產品僅供科研使用。

規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝

Klenow DNA 聚合酶 131235a 10 uL（紅蓋）

10×Klenow DNA 聚合酶緩沖液 131235b 10 uL（白蓋）

dATP 溶液，2.5mM 130912 10 uL（黃蓋）

dTTP 溶液，2.5mM 130913 10 uL（綠蓋）

dGTP 溶液，2.5mM 130914 10 uL（藍蓋）

dCTP 溶液，2.5mM 130915 10 uL（紫蓋）

Biotin-11-dUTP 溶液 120653b 10uL（本色蓋僅 B 型）

DIG-11-dUTP 溶液 120653c 10uL（本色蓋僅 C 型）

超純水 100935 1 mL（藍蓋）

使用手冊 120653sc 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年

自備試劑 DNA 模板

使用方法 1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設置一個 20uL 體系的標記反應（如果需

要標記更多探針，請增加標記體積而不要增加探針 DNA 的濃度）：

成份 用量

待標記 DNA（3’凹陷） 100-200 pmol

Klenow DNA 聚合酶緩沖液，10× 2 uL

自備標記核苷酸（A 型）

或Biotin-11-dUTP 溶液（B 型）

或DIG-11-dUTP 溶液（C 型）

1 uL

與標記核苷酸不相同的三種非標記

核苷酸，2.5mM(對 B 型和 C 型，標

記的是 dUTP，相當于 dTTP，因此

應該加 dATP、dCTP 和 dGTP)

各 1uL，共 3uL

Klenow DNA 聚合酶 1 uL

超純水 補到 20 uL

2. 37℃反應 30 分鐘。

3. 70℃ 10 分鐘滅活 Klenow DNA 聚合酶。

4. 如果需要，可以用斑點雜交法檢測標記效率（本產品不含相關試劑）。

5. 如果是非同位素標記，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非同位素標記的探針，請不要酚/氯仿抽提，因為非同位素標記物一般會使探針 DNA 進入有機相而丟失。

6. 使用時需將探針以 1-8 ng/uL 的終濃度加入到雜交液中（如果探針是雙鏈 DNA，加入前還需熱變性）。如果不立即使用，非同位素標記的探針DNA 可-20℃長期放置一年，同位素標記的探針 DNA 不能放置。