柱式真菌DNAout2.0

產(chǎn)品及特點(diǎn) 

真菌 DNA 提取是一個(gè)難題，一是因?yàn)檎婢芯z體、孢子等多種完全不同的結(jié)構(gòu)形態(tài)，二是因?yàn)槠浼?xì)胞壁一般都很厚，比較難以破碎。本產(chǎn)品專門用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細(xì)胞中提取 DNA。它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內(nèi)的所有試劑和耗材。

2. 既可以采取液氮研磨法破裂真菌，也可用玻璃珠法破碎真菌，兩種方法均屬于物理方法，遠(yuǎn)比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學(xué)破壁法重復(fù)性好，也不容易帶入外源真菌 DNA（注：文獻(xiàn)報(bào)道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌 DNA 污染，用于提取真菌 DNA 往往會(huì)造成污染）。

3. 本方法提取一個(gè)樣品只需要 20 余分鐘，方便、快速和高效。

4. 一次可以處理 5 mL 的過夜真菌培養(yǎng)物，所得的基因組 DNA OD260/OD280 一般都在 1.8 左右，長度一般在 20 kb 左右，每 mL 菌液的 DNA 產(chǎn)率一般在 1-3ug?？梢灾苯佑糜?PCR 和酶切等后續(xù)試驗(yàn)。運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，保存期為一年。 自備試劑 無菌水。 使用方法 1. 收集菌體或孢子:

1.1、 對(duì)菌液：取 3-5 mL 過夜培養(yǎng)的真菌菌液 (OD600一般在 1 以上)到干凈的塑料離心管中，12000 rpm 離心 2 分鐘棄上清留菌體沉淀。

1.2、 對(duì)菌落：用接種針在在培養(yǎng)基上刮取盡可能多的真菌菌落（約 50mg），轉(zhuǎn)移到裝有 1mL 自備無菌水的干凈的塑料離心管中，洗滌下接種環(huán)上的菌體。12000 rpm 離心 2 分鐘棄上清留菌體沉淀。

1.3、 對(duì)孢子材料，一般取 0.1g 左右，直接加入到塑料離心管中，然后進(jìn)入下一步操作。

2. 在上述真菌材料中加入自備的無菌水 1mL，振蕩半分鐘后 12000 rpm 離心 2 分鐘棄上清留菌體沉淀。此步用于洗滌菌體。

3. 裂解真菌：

3.1、 液氮研磨：在研缽中液氮研磨上述真菌材料成粉，然后轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，在離心管中加入 500 uL 溶液 A，常溫渦旋震蕩 3 分鐘。

3.2、 玻璃珠破碎法：在沒有液氮的條件下，采用此法。在菌體沉淀中加入 500uL 溶液 A 和 0.5 克的玻璃珠，常溫渦旋震蕩 10 分鐘。

4. 在離心管中加入 500 uL 溶液 B，渦旋震蕩 3 分鐘，12000 rpm 離心 2 分鐘，將上清液全部轉(zhuǎn)移到一個(gè) 5mL 的干凈的塑料離心管中。

5. 在上清中加入 3 倍體積的溶液 C，顛倒數(shù)次混勻后，分三次上離心吸附柱，每次上柱后均先室溫放置 2 分鐘，然后 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉穿透液，再第二次上柱，重復(fù)上面的操作，直到掛柱步驟完成。

6. 在離心吸附柱中加入 500 uL 通用洗柱液，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉穿透液。此步可以洗滌掉雜質(zhì)。

7. 重復(fù)上步操作一次。

8. 12000 rpm 空柱離心 1 分鐘。

9. 加入 50-100 uL DNA 洗脫液 2.0，室溫放置 1 分鐘以上，12000 rpm 離心 1分鐘，穿透液即為真菌 DNA 樣品。

10.為了得到更多的 DNA 樣品，可以重復(fù)上步操作 1-2 次。

11.所得 DNA 即可立即使用或放冰箱長期保存。