加A試劑盒
產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品利用 Taq DNA polymerase 的不依賴于模板的末端轉(zhuǎn)移酶活性,在只有 dATP 存在的情況下,在平末端的 DNA 片段加上一個 dA 尾巴,使平末端片段也能被 T 載體克隆。
1. 簡單,2 X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要單獨準(zhǔn)備。
2. 適用于任何平末端的 DNA 片段,包括 Pfu DNA polymerase 等酶合成的 DNA 片段。
3. 產(chǎn)物可以直接用于與 T 載體的連接。
加A試劑盒
規(guī)格及成分 成份 編號 塑料袋包裝
2 X Tailing Buffer 60105A 1 mL
Taq DNA polymerase (5U/uL) 51206 50 μL
使用手冊 60105sc 1 份
加A試劑盒運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 PCR 片段、超純水
使用方法 一:反應(yīng)前純化處理:
用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶擴增得到的 DNA 片段,必須經(jīng)過徹底的去除殘留的酶的處理過程(如酚/氯仿抽提或 Proteinase K 處理),否則它們將在加 A 反應(yīng)時,切除掉加上的 尾巴,干擾反應(yīng)??梢圆扇∧z回收和酚/氯仿抽提法等常規(guī)方法純化,最后溶解在水或 TE 中,終濃度以 0.1 ug/uL 為宜。
二:加 A 反應(yīng)
在干凈的 0.5 mL 或 1.5 mL 離心管中,分別加入下列成分:
回收的 DNA 片段(0.2-2 ug)
25 uL 2 X dA Tailing Buffer
1 uL Taq DNA polymerase(5 U/uL)
補水到 50 uL 后 72℃保溫 2 小時
三:反應(yīng)后處理
加 A 反應(yīng)后,Taq DNA polymerase 將與 DNA 末端緊密結(jié)合,所以必須酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 處理后再用酚/氯仿抽提效果會更好。得到的 DNA 溶于適量水和 TE 中后即可用于 T 載體的連接反應(yīng)。
關(guān)鍵字: 加A試劑盒廠家;加A試劑盒現(xiàn)貨
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