白細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品及特點(diǎn) :本產(chǎn)品為即用型白細(xì)胞裂解溶液,可以用于裂解分離純化好的血液白細(xì) 胞,用于 DNA 提取、RNA 提取等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分: 成份 編號 大立盒包裝 白細(xì)胞裂解液 250 mL 使用手冊 1 份
運(yùn)輸及保存 :常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
自備試劑: Tris 飽和酚、氯仿、乙酸鈉溶液、乙醇、TE 緩沖液等
使用方法: 下面以 DNA 提取為例:
1. 取新鮮抗凝血 5 mL,在 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中用紅細(xì)胞裂 解液裂解紅細(xì)胞(紅細(xì)胞裂解液有幾種配方,用戶需要根據(jù)所選產(chǎn)品的 使用手冊進(jìn)行操作,這里不列出每種的詳細(xì)步驟),也可以直接 2500 rpm 離心 5 分鐘后取白細(xì)胞層到一新的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心 管中。
2. 在所得的白細(xì)胞沉淀中或所得白細(xì)胞層溶液中加自備的生理鹽水使得 白細(xì)胞的終體積為 2 mL。
3. 加 1 mL 的本產(chǎn)品,混勻后 55℃ 保溫 3 小時,其間輕輕振搖數(shù)次。
4. 加入 3 mL 自備的 Tris 飽和酚,輕輕震搖 5 分鐘,使得水相和酚相充 分分開。
5. 3500 rpm 離心 15 分鐘,上層水相含 DNA,中間白色層為蛋白質(zhì), 下層為酚相。
6. 將非常粘稠的含 DNA 的上清液轉(zhuǎn)移到一干凈的 10 mL 或 15 mL 的塑 料離心管中。
7. 再用 Tris 飽和酚重復(fù)上面的抽提步驟,直到離心后中間層沒有白色的 蛋白出現(xiàn)為止。
8. 在上清液中加入等體積的自備的氯仿,輕輕震搖 5 分鐘,3500 rpm 離 心 5 分鐘,轉(zhuǎn)移上清液到一干凈的 10 mL 或 15 mL 的塑料離心管中。 此步可以除去殘留的酚。
9. 在上清液中加入 0.1 倍體積的自備的 3 M 乙酸鈉溶液(pH 5.2)和 2 倍體積的無水乙醇,輕柔顛倒混勻,將出現(xiàn)絮狀的 DNA 沉淀。
10. 用移液槍頭將 DNA 沉淀挑取出來,轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 的塑料離心管中, 用 75%的乙醇浸泡 2 次。此操作可以去除 DNA 中殘留的鹽離子。
11. 轉(zhuǎn)移 DNA 沉淀到一個 1.5 mL 的塑料離心管中,空氣中放置 10 分鐘 左右待乙醇揮發(fā)后,加入 0.5 mL 自備的 TE 緩沖液溶解 DNA,4℃放 置待用。
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