TdT加尾法DNA探針生物素標(biāo)記試劑盒
原理及特點(diǎn)本產(chǎn)品是基于 TdT 末端轉(zhuǎn)移酶能夠在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的原理而設(shè)計(jì),該反應(yīng)的示意圖如下本產(chǎn)品是在上述原理的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的,具有下列特點(diǎn):
1. 快速,15 分鐘即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
2. 不但可用于單鏈 DNA 和 DNA Oligo 標(biāo)記,還可用于 3’突出的雙鏈DNA 標(biāo)記,但后者標(biāo)記效率稍低。
3. 可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高辛標(biāo)記的核苷酸等)。
4. 提供不帶標(biāo)記核苷酸、帶生物素標(biāo)記核苷酸和帶地高辛標(biāo)記核苷酸三種選擇。
5. 同時(shí)提供非標(biāo)記的 dATP,用戶(hù)可以用其調(diào)節(jié)加尾長(zhǎng)短和標(biāo)記核苷酸摻入比例。
6. 標(biāo)記的探針可用于電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)、原位雜交(ISH)、NorthernBlot(不推薦用于低豐度 RNA 檢測(cè))、小 RNA Northern、Southern Blot(不推薦用于單拷貝基因檢測(cè))、菌落雜交、斑點(diǎn)印跡雜交分析等。
TdT加尾法DNA探針生物素標(biāo)記試劑盒
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 十孔盒包裝
TdT 緩沖液,5× 90605a 20 uL
TdT 末端轉(zhuǎn)移酶(10 U/uL) 90605b 10 uL
dATP,2 mM 90605c 5 uL
標(biāo)記核苷酸 見(jiàn)注 (A、B、C 不同,見(jiàn)注)
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè) 90605sc 1 份
注:A 型用于自選標(biāo)記,用戶(hù)需自備標(biāo)記核苷酸,本產(chǎn)品不提供標(biāo)記核苷
酸;B 型提供 5 uL Biotin-11-dUTP(CAT#:100920);C 型提供含 5
uL DIG-11-dUTP(CAT#:100921)。
TdT加尾法DNA探針生物素標(biāo)記試劑盒運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年
自備試劑 DNA 模板
使用方法 1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設(shè)置一個(gè) 20 uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)(如果
需要標(biāo)記更多探針,請(qǐng)?jiān)黾訕?biāo)記體積而不要增加探針 DNA 的濃度):
成份 用量
探針 DNA 100-200 pmol
TdT Buffer,5× 4 uL
標(biāo)記核苷酸,1 mM
(A 型需自備標(biāo)記核苷酸) 1 uL
dATP,2 mM (見(jiàn)下注)
TdT 末端轉(zhuǎn)移酶(10 U/uL) 2 uL
超純水 補(bǔ)到 20 uL
注: dATP 可以不加,但這樣得到的加尾全部是標(biāo)記核苷酸,由于 DIG 或 biotin 的空間阻礙,這種探針的靈敏度不一定。如果不摻入 dATP 的探針雜交效果不好,在加尾反應(yīng)時(shí)摻入一定比例的 dATP 到標(biāo)記核苷酸中,以控制標(biāo)記核苷酸的密度不至于太高,這樣可以提高比活。標(biāo)記核苷酸和非標(biāo)記的 dATP的具體比例為多少,可以自己優(yōu)化。
2. 37℃反應(yīng) 15 分鐘,延長(zhǎng)到 30 分鐘也可以。如果沒(méi)有非標(biāo)記核苷酸存在,一般可以加尾 3-5 個(gè) Biotin 或 DIG 標(biāo)記的核苷酸(標(biāo)記物空間阻礙抑制延長(zhǎng));如果有在加尾反應(yīng)中加入一定比例的非標(biāo)記核苷酸 dATP(其他dNTP 也可,只是本試劑盒只提供 dATP 而已),每條探針上可加上約 100個(gè)核苷酸,平均含 5 個(gè)標(biāo)記核苷酸
3. 70℃ 10 分鐘滅活 TdT 酶。
4. 如果需要,可以 PAGE 電泳+銀染(相關(guān)試劑需要另購(gòu))檢測(cè)標(biāo)記效率,
帶標(biāo)記的探針泳動(dòng)速度將低于沒(méi)標(biāo)記的探針。
5. 如果是非同位素標(biāo)記,探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非同位素標(biāo)記的探針,請(qǐng)不要酚/氯仿抽提,因?yàn)榉峭凰貥?biāo)記物一般會(huì)使探針 DNA 進(jìn)入有機(jī)相而丟失。
6. 使用時(shí)需將探針以 1-8 ng/uL 的終濃度加入到雜交液中(如果探針是雙鏈 DNA,加入前還需熱變性)。如果不立即使用,非同位素標(biāo)記的探針DNA 可-20℃長(zhǎng)期放置一年,同位素標(biāo)記的探針 DNA 不能放置。
關(guān)鍵字: TdT加尾法DNA探針生物素標(biāo)記試劑盒廠家;TdT加尾法DNA探針生物素標(biāo)記試劑盒現(xiàn)貨
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專(zhuān)營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾#⒃诒本?、廣東,江西,吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。