柱式動(dòng)物DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品在基因動(dòng)物 DNAOUT(CAT#:3670)基礎(chǔ)上改良而得的柱式升級(jí)產(chǎn)品,主要用于快速提取新鮮或冷凍的動(dòng)物組織中的基因組 DNA。跟動(dòng)物 DNAOUT相比,它具有下列特點(diǎn):
1. DNA 更加純凈,大多數(shù) DNA 樣品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之間。
2. DNA 產(chǎn)率一般在 200ug/g 左右(跟組織種類密切相關(guān))。
3. 可直接用于 PCR、酶切、雜交等后續(xù)反應(yīng)。
4. 操作更加簡(jiǎn)單,離心吸附操作代替離心沉淀,整個(gè)過(guò)程室溫操作約 10 分鐘,適合大規(guī)模樣品處理。
5. 安全無(wú)毒,本試劑盒對(duì)人體無(wú)毒,無(wú)腐蝕性和刺激性氣味。
6. 性價(jià)比高,質(zhì)量和國(guó)外同類產(chǎn)品相當(dāng),但價(jià)格更便宜。
柱式動(dòng)物DNAout
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 大紙盒包裝
溶液 A 71206A 40 mL 溶液 B 71206B 20 mL 溶液 C 71206C 50 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 71206sc 1 份
柱式動(dòng)物DNAout運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存、有效期一年。自備試劑 氯仿(也可省略,但產(chǎn)量會(huì)降低)
使用方法 注意:溶液 A 容易產(chǎn)生沉淀,溶液 B 十分粘稠,用前均需要在 65℃水浴中加熱使沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分搖勻。
1. 根據(jù)使用材料的不同進(jìn)行下列操作:
a) 對(duì)貼壁細(xì)胞:吸盡培養(yǎng)液,在每 10 平方厘米細(xì)胞中加入 0.8 mL 預(yù)熱的溶液A,用槍充分吹打以確保細(xì)胞全部裂解,然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。
b) 對(duì)懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,吸盡液體,在每 1-5×106懸浮細(xì)胞中加入 0.8 mL預(yù)熱的溶液 A,用槍充分吹打以確保細(xì)胞全部裂解。然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 塑料離心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 細(xì)胞,0.8 mL 溶液 A的細(xì)胞使用量不要超過(guò) 1×106 個(gè)細(xì)胞。
c) 對(duì)新鮮或冷凍的組織:先將剪切成小塊的新鮮組織或冷凍保存的組織放入 10mL 或 15 mL 塑料離心管中,每 50-100 mg 組織加 0.8 mL 預(yù)熱的溶液 A,用剪切式勻漿器勻漿 30 秒左右,然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。對(duì)肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織(細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的 DNA),建議組織的使用量不要超過(guò) 50 mg。
d) 對(duì) DNALOCKER 保存組織:先用紙吸去 DNALOCKER 液體后再剪切成小塊,其余操作同新鮮或冷凍組織的處理。
2. 加入 0.4 mL 預(yù)熱的溶液 B 到裂解液中。由于溶液 B 十分粘稠,可將 1mL 槍頭剪掉一截再用,也可以用稱量方法加 0.4 g。加入溶液 B 后需要顛倒數(shù)次充分混勻。
3. 65℃水浴 5-10 分鐘。如果室溫放置,DNA 產(chǎn)量將降低 10-20%。
4. 加入 0.2 mL 自備氯仿,振蕩器上充分振蕩混均 30 秒,此時(shí)溶液將呈乳白色。一定要確保離心管底的液體被震蕩起來(lái)。
5. 12000-15000 g 室溫離心 2 分鐘。上清透明,中間層為白膜(蛋白層)。
6. 小心將上清液平均轉(zhuǎn)移到兩個(gè)新的離心管中,避免觸及中間的白膜。
7. 每個(gè)管中加入 1.5 倍體積的溶液 C,充分顛倒混勻。
8. 分兩次上柱(即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液,然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液)。
9. 加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液。
10. 加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液。
11. 12000-15000 g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的通用洗柱液會(huì)污染 DNA。
12. 室溫放置半分鐘使殘留乙醇揮發(fā)。
13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中,加入 50-100 uL DNA 洗脫液 2.0,室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。
14. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為 DNA 樣品,可以立即使用或存放于冰箱待用。
關(guān)鍵字: 柱式動(dòng)物DNAout廠家;柱式動(dòng)物DNAout現(xiàn)貨
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾?,并在北京、廣東,江西,吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。