柱式病毒RNA提取試劑盒

柱式病毒RNAout

產(chǎn)品及特點 

本產(chǎn)品是在天澤基因一管式病毒 RNAOUT 的基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒 RNA 的產(chǎn)品，它具有下列特點： 1. 操作簡單，整個過程只需要 20 分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補加乙醇。 2. 靈敏度高，通過 RT-PCR 檢測到的最終靈敏度可以達到 50 拷貝/mL。 3. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。 4. 如果加上病毒離心富集步驟，最多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。 5. 與 RT-PCR 和熒光 RT-PCR 兼容。 6. 價廉物美，性價比遠低于國外同類產(chǎn)品。 7. 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細胞上清液等無細胞材料。

規(guī)格及成分 

成份 編號 大紙盒包裝 RNA 病毒裂解液 3073a 30 mL 上柱結(jié)合液 190602 40 mL 離心吸附柱 60911 50 套通用洗柱液 60408 50 mL RNA 洗脫液 71207 10 mL 使用手冊 71001sc 1 份

運輸及保存 

常溫運輸和保存，RNA 病毒裂解液長期（1 周）放置需放 4℃，有效期一年。

自備試劑 

無

使用方法 

如果有 N 個樣品，標記 N+2 個 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006)，多出的一個為陽性對照，一個為陰性對照。為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管上做個標記，以在后續(xù)操作時區(qū)別向心面和離心面。然后各加入 0.2 mL 液體樣品（血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等等）。 1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品，則將拭子放入 0.2mL 自備生理鹽水中擠壓出液體，然后取 0.2mL 進行提取。 1.2、 如果是糞便等半固定樣品，則取約 0.3mL 的樣品，加入 0,3 自備生理鹽水，震蕩重懸，離心取 0.2mL 上清進行提取。 1.3、 如果血液，細胞培養(yǎng)液等含細胞的液體，可以離心用上清，也可以直接取用，但后者提取的 RNA 中有細胞的基因組 DNA 污染。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 時由于所加入 ACD 會增加體積，樣品會被稀釋，得到的病毒滴度會比使用 EDTA 低 15%左右。血漿按 0.6mL/ 管的量分裝保存，以避免反復(fù)凍融。 1.4、 如果樣品是實體組織或培養(yǎng)細胞，則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心，用 0.2mL 上清液（含病毒）進行提取，但此種情況下最后得到的 RNA 不可避免的會含有基因組 DNA 污染。 1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 繼續(xù)操作。 2. 加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液，振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘。注意：RNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。 3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中，顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液（0.8 mL）到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。 4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。 5. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。 6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。 7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。 8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。 9. 12000 g 室溫離心半分鐘。 10. 在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL RNA 洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的 1.5 mL 離心管中，室溫放置 2 分鐘。 11. 12000 g 室溫離心 1 分鐘，離心管中收集的樣品即為 RNA。 12. RNA 樣品可以直接用于 RT-PCR 或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，也可放-80℃長期保存。注：病毒提取的核酸量遠不足以電泳檢測，提取后可通過 RT-PCR 檢測，最終靈敏度可以達到 50 拷貝/mL。

相關(guān)資料

常見人類疾病相關(guān) RNA 病毒病毒 疾病名稱 類型 長度(Kb) Measles virus measles ssRNA 4.5~85 Hepatitis A Virus hepatitis type A ssRNA 7.5 Poliomyelitis virus polio ssRNA 7.8 Rubella virus German measles ssRNA 7.9 Hepatitis C Virus hepatitis type C ssRNA 9.3~9.4 Human immunodeficien cy virus AIDS ssRNA 9.7 Dengue Virus dengue ssRNA 11 Yellow fever virus yellow fever . ssRNA 11 Rabies virus rabies ssRNA 11.9 Influenza A virus influenza ssRNA 13.5 Mumps virus mumps ssRNA 15.4 Ebola virus virus hemorrhagic fever ssRNA 19

疑難解答

Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA 或 DNA)為何很難？ A：原因一是量少。病毒顆粒中的 RNA 或 DNA 是作為遺傳物質(zhì)保存，每個病毒最多只攜帶幾個拷貝(而一個細胞中有上萬種 RNA 分子，每種 RNA 有很多拷貝)，同時其長度也十分有限(一般不到細胞基因組的萬分之一)，樣品中病毒數(shù)往往又不是很多，使得樣品中病毒核酸的絕對量往往比一個細胞中核酸的絕對量還少，所以操作中十分容易丟失。另外，由于得到的核酸絕對量很少，不能使用電泳和測 OD 檢測，只能通過 PCR 或 RT-PCR 檢測，而 PCR 或 RT-PCR 的條件又需要優(yōu)化，所以要確定提取是否成功十分不容易。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 柱式病毒 DNAOUT